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yanj13 如题！希望高人能说说各种方法的详细的原理和步骤！谢谢先！急用！谢谢！～zhujoker 我想你自己还是多看一点吧，这么多的介绍，我都不知道怎么说才好bigbang_0_0 直接从公司买woxingwosu bigbang_0_0 wrote:直接从公司买恩，一般从公司买就可以了，方便又快捷～～微尘9923 woxingwosu wrote:恩，一般从公司买就可以了，方便又快捷～～那些公司有我们所需要的各种siRNA吗？比如说我要去抑 ...

樊小乖 请教各位高手，我要用质粒转染人支气管上皮细胞，用哪个试剂盒比较好，请指点一下zhujoker 不知道你是使用得细胞株还是原代的，不同情况不同处理樊小乖 是传代细胞本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

吴彬彬 请问基因的结构性表达和功能性表达的具体定义分别是什么？？求解答，谢谢！zhujoker 不知道你的这种名称从何得来，为什么需要一个具体的定义？为什么非要追求一个死死的地定义，而不理解其具体作用hongyang8318 你说的基因结构性表达可能是你翻译错了，应该说是基因的组成性表达（constitutive gene 或者constitutively expressed）。具体定义指：一类在任何情况下不经诱导均在细胞中有所表达 ...

wrwy 因实验急需MCF7,SKBR3乳腺癌细胞，哪位好心人能交换，本实验有T47D,231.293等细胞。谢谢。msniu 我有MCF-7，站内联系chenrongjun2011 本人在广州做实验，需要用到SKBR3，能否相赠一点，请加QQ1765730072或电话15915836004本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcom ...

qisanni05 1)我得到的pre-miR-10a系列如下：1 gatctgtctg tcttctgtat ataccctgta gatccgaatt tgtgtaagga attttgtggt 61 cacaaattcg tatctagggg aatatgtagt tgacataaac actccgctct2)在NCBI Blast得到pre-miR-10a及其上下游各100bp序列如下：1 taaagaggaa ggagtcttcg tgtggccagt caccag ...

familar 小妹困惑，在此请教大师！做了几次beta-catenin的表达（western），都没做出来，目的蛋白的分子量是92，可是，做出来的印记总是在下方，明显的不是目的蛋白的位置。我师兄说，做beta-catenin要提核蛋白才能做出来，可我之前也有做出来过的！请教各位有经验的同志，这样的现象是何解？woxingwosu 不一定要提核蛋白才能出来。b-catenin在核内核外都有分布。应该是你实验过程中的问题。每次 ...

owen79 各位大侠，小弟还想问一下用WESTERN BLOT检测小鼠肝脏NF-KB的时候，肝匀浆以后离心的转速和时间是多少啊？还有就是取肝脏的时候怎样把肝脏的血方的干净点啊？影响离心。haodanzhang 12000转，4°或者常温都可以。chuckdouble owen79 wrote:各位大侠，小弟还想问一下用WESTERN BLOT检测小鼠肝脏NF-KB的时候，肝匀浆以后离心的转速和时间是多少啊？还有就是取肝脏的时候怎样把 ...

qisanni05 如何确定microRNA是内含子型还是外显子型路得自己走 1. 可以在miRBase上的每个miRNA具体信息中查看2. 汇总内含子编码的miRNA：http://intragenic.astridresearch.com/intragenic/另附我的拙作，欢迎交流：1. http://epub.cnki.net/grid2008/detail.aspx?QueryID=4&CurRec=12. 内含子microRNAs：基 ...

hawk2003 RNA干扰：shRNA脂质体转染HuT102细胞，转染率特别低，低于10%，请问各位大侠有什么好的建议？有人推荐电转，对电转不太了解，也不知道哪实验室能做电转，请大家给个建议！谢谢！用慢病毒转染效果怎么样？zhujoker 推荐使用慢病毒干扰，不仅效果好，而且现在的认可度高。baby_susan 转染条件摸索过吗，转染试剂可以选择更换一下看看，实在不行要么直接用化学合成的siRNA 转染，要么慢病毒包装后转染ha ...

gaodong1234567 各位前辈：我刚进入实验室不久，最近有项研究需要国外某著名实验室的腺病毒做研究，不知能都索要，还是索要质粒，自己构建，哪位有经验的同道请赐教，谢谢！woxingwosu 主要还是质粒吧，其他的东西别人即时要给你，也不好寄过来呀，只有质粒最方便，滴在纸上就过来了。西厢蔷薇 好像还要个什么承诺书，需要所在学院领导签字woxingwosu 那就签呗。或者换一家看看本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意 ...

yuanyuan_626 想问一下我想研究一种细胞的过度凋亡是不是与AKT/PKB 下调有关，那我检测一下AKT 的 mRNA，及AKT ，P-AKT 的表达量，这样的思路有没有问题？我是一只小菜鸟，还没开始做实验，最近看这方面的文献看的脑袋混乱了旁观者清，请大家帮我分析一下有没有可行性小妹在此谢过了yuanyuan_626 这个想法行不通吗？求指教rarazhuzhu 谈谈我的看法楼主想要验证细胞凋亡途径中是否有Akt/PKB参与首先要确 ...

taohill 最近需要做过表达，有以下几个问题：1 克隆CDS,还是cDNA?2 该蛋白有两个剪切体，选那个呢？3 哪个数据库有蛋白表达谱？谢谢woxingwosu 你的概念比较模糊：1：克隆的时候当然是逆转录形成CDNA后去PCR克隆2：选哪个剪切体要看你的实验目的，是做一个还是两个都做3：看看www.genecards.com和http://www.wikigenes.org有没有蛋白表达谱了taohill thanks!taohill ...

吴佰霖 SiRNA及miRNA下调靶基因多少为有意义？20％？25％还是更多，当然下调越多越好啦大家看文献有注意这个问题吗？fqpcr 75%以上lide658 我个人认为这个不能看下调多少，而是应该通过多次重复实验后，用统计学分析计算P值。仅供参考。willion1985 siRNA 70%miRNA 40%就很高了吴佰霖 请问有甚么文献提到这个问题吗本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成 ...

xieguozhu 在下欲构建两个含GFP的慢病毒过表达载体，但是有一个关键问题就是我构建的这两个目的基因是要导入同一个细胞的，我要表达的目的基因是miR-141, miR-200c. 要感染的细胞是MDA-MB-231， 这两种表达载体都是GFP标记的，我不知道在最后怎样判断两个基因都导入细胞了，后来我在想可不可以在同一个病毒上同时插入两个目的基因，比如miR-200c/miR-141(因为这两个基因在同一条染色体上，且靠的很近 ...

cgaoy121 请问PKA抑制剂H89用什么溶剂来溶解，DMSO，水，培养基还是PBS？cgaoy121 找到了，用DMSO鱼cynthia DMSO溶解后 用什么稀释 PBS么cgaoy121 PBS或者培养基都可以稀释chenlinghezzx 一般是用培养基。萍萍-2011 用培养基稀释本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

freezingfall 大家好，我最近做的Pretro-HIG-XX以及对照Pretro-HIG的转染胃癌细胞系SGC7901，用的是lipofectamine2000试剂，六孔板按照protocol步骤转染，连续三次转染之后对照组的细胞均死亡，换HD试剂转染后不存在这种情况，可排除质粒问题，请问各位战友，究竟是什么原因导致如此现象，困惑中~~~~~~~~~~~~zhujoker 自己注意一下你的转染试剂是不是假的，我估计这个 ...

keep-smile 最近在做原代培养的神经细胞的凋亡研究。对于六孔板中蛋白提取有些疑问。药物处理后，总有一些细胞漂浮起来，估计就是凋亡或坏死细胞，直接吸弃培养基怕对凋亡相关蛋白检测有影响。如果细胞消化离心，又担心提取不够迅速使一些目的蛋白去磷酸化，比如MAPK信号通路蛋白。请问大家，应该怎么解决这个问题呢，有什么好的办法？ronaldo_zj 1. 我们也遇到过类似问题，但经过检测，我们发现培养基上清漂浮的细胞确实就是晚期 ...

illusionsl 我准备做人的H19印记基因的甲基化检测，不知道哪位大侠听说过人的H19 DMR的多态性？我是希望能够利用其多态性，区分出父源或母源来源，提高检测效率和结果分析的准确性。我自己目前是没有查到相关文献。不胜感谢！我的QQ：602047slytjiaofei 看看这篇是否有用，链接如下：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16391843H19-DMR allele-specific m ...

寒凉 我最近要做E-cadherin DNA质粒转染HK-2细胞，想请教高手们在哪可以买到相关的质粒和使用何种转染试剂较好，谢谢！zhujoker 转染效率主要取决于你的细胞，转染试剂只是一个次要的方面，如果你的时间来得及，最好建议你使用慢病毒载体进行过表达，这样花的时间不是很多，效果肯定比转染好，至于质粒很多公司都有卖的。寒凉 谢谢您的指导本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以 ...

3200 本人最近需要使用到PDTC做一批大鼠实验，由于新手上路，请请教各位战友，PDTC该使用何种液体配制（有人说用水不易溶解），配制后采用何种方法灭菌（是否耐高温）？如何保存？不胜感激！！叩谢3200 再次叩谢各位战友，比较急哈，可以直接讲解，也可电邮luohan_32008462@163.com.谢谢，谢谢！haodanzhang 配制：一般用双蒸水溶解，不好溶解的话可以加点DMSO，然后用双蒸水稀释至相应浓度。灭菌：可以用0. ...