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freezingfall 请问战友有没有什么能常温将RNA携带的方法，求具体处理步骤，不胜感激freecell 方法1： 利用INVITROGEN的RNALATER试剂保存RNA。Room-temperature storage (18–25°C) in RNAlater is possible for up to 7 days according to manufacturer’s instructions, although significant mRNA degradation was det ...

人人都爱小勇哥 我提取植物基因组DNA ，并设计引物进行PCR反应，但是出现弥散现象，弥散部位很很亮，然后我进行胶回收，在切胶过程中切取较量部位，然后进行回收，电泳检测发现仍有弥散。不知道是怎么回事，希望各位高手给予指点，谢谢！！lifz2001 弥散原因很多，贴个图看看。体系？反应条件讲清楚？wangch84 降低引物浓度和模板投入量本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的 ...

zxsys123456 想要查阅有关模拟磷酸化方面的文献，有谁知道该怎么查？或者指点一下该怎么做突变？bigbang_0_0 突变成带负电荷的氨基酸，比如谷氨酸或天冬氨酸豆龟 zxsys123456 wrote:想要查阅有关模拟磷酸化方面的文献，有谁知道该怎么查？或者指点一下该怎么做突变？请问楼主，找到相关文献了吗？酪氨酸的磷酸化怎么模拟？本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为 ...

若水无涯 请问有谁做过3’末端切平啊？我要做平末端连接，先将目的片段通过限制酶进行酶切，可两端产生的都是3'突出末端，不知道该用那种酶进行切平比较好，看见有好多都是补平的体系，现不知道具体用哪个公司的那种酶效果会比较好，是个新手，谢谢了！sgc7901 neb不错，值得推荐。NEB 若水无涯 您好！您如果要做3‘端的切除，NEB有以下几种酶建议您可以考虑： DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment and T4 DNA Poly ...

tutufei miRNA如何构建到慢病毒载体？与基因构建到质粒载体有何区别吗？最好有具体的实验步骤，或相关资料，不胜感激！大鹏鸟 本质上没啥区别的。步骤：1、设计好premiRNA----带有相应酶切位点2、化学合成3、退火形成双链4、连接到相应载体5、转化感受态，6、酶切或者PCR鉴定,测序7、扩增阳性质粒，包装慢病毒，进行细胞学实验。其实不建议自己构建miRNA慢病毒质粒，现在都已经商品化了，直接买来就可以用，既节约时间，又 ...

viola2010 您好，我是新手，请问核蛋白如何提取？试剂盒那个公司较好？kkndd 不用试剂盒，这篇1989年的文章的方法，我们实验室现在还在用，非常有效，非常简单，Nucleic. Acids. Res. (1989) 17: 6419. (PMID: 2771659)这是一篇比较新的文章，用的也是那篇89年的方法，Mol. Cell. Biol. (2000) 20: 8783-92. (PMID: 11073979)xhjggl 上海生工的 BSP009shylook 很多kit都可以用呀 ...

zjf0709 左侧的是提取的PUC18质粒，中间的marker不太好（可以忽略），右侧的marker是DL2000，由于跑得时间过长所以marker跑散了，右侧DL2000最上面的一个条带是2000bp，PUC18的序列是2686bp，为什么会跑的比2000bp还快？这个现象正常吗？是不是超螺旋的问题？请大家帮忙解答，谢谢！！！zjf0709 自己顶一下，请大家帮忙看一看。济南基美 是超螺旋的质粒，所以跑的快。一条带，说明都是 ...

happy0coral 哪位大侠能告诉我用pre-miR转染是属于瞬时还是稳定转染啊，另外是不是只要是转染就叫miRi啊sxj_fish 很多基因都是可以转染的　，ＤＮＡ也可以转染，还有ＳＩＲＮＡ也是可以转染的芍药香 可以选用瞬时转染也可以选用稳定转染，不过现在microRNA的前体转染大多是瞬时的。转染只是实验方法，应用于多种核酸的转入。artneer pre-miRNA是属于瞬转，因为转染miRNA的成熟序列很多情况下效果 ...

zhangtt0530 各位，我做此连接两个月了，始终连不上，此图为连接产物跑电泳，第2道为pet32a载体单切自连，肉眼看出现两条带；第4道为载体与片段连接，在载体位置有一条带，下面还出现n条带，6道为载体单切回收，7道为载体双切回收，8道为片段双切回收。载体与片段摩尔比应该能保证在1:6-1:10之间，10μl连接体系，总DNA含量在60ng左右，用的NEB连接酶，双酶切用的takara酶，酶切回收用水洗脱，4℃连接2 ...

zhichunelan 邮件的内容如下： Please try S.Choi. I think that the PI moved to a university, although I am not 100% sure. I did EM work for them and Dr. Choi is the contact person. 请问其中PI是什么意思，课题组吗？EM work又是什么意思，是说的一部分工作吗？我以前是临床专业，现在刚刚开始涉猎分子细胞生物学方面的研究，各方面都有很多欠缺，希望大家多多帮忙。也希望有类似关于邮件翻译问题的 ...

zhangdepu_410 有做出过或者是看到过关于NF-kB激活了，但是snail却被抑制的实验么？我最近做一个实验就出现了这样的结果，查了一些文献NF-kB都是激活snail的，让我很是困惑，希望大家帮帮我！感激不尽！paroxysm 1.检测的NF-kappaB是转录水平上的激活(EMSA等等)还是磷酸化形式的上调(WB)，这里面有些不同。2.检测snail的负调控元件和抑制通路。zhangdepu_410 paroxysm ...

cpumxl 我现在想让公司帮我全合成所要表达蛋白的核酸序列，这个序列是在NCBI中找到的mRNA序列中的CDS区（不知道这样做可不可以），合成的序列要在大肠杆菌中表达，那么这个CDS区中的核酸序列要不要先优化成大肠杆菌偏爱性密码子再去合成啊？谢谢！qing0831 jiawo qq2582634920济南基美 最好要优化。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

dyp1998 我想请问各位前辈，我想在大鼠细胞中阻断MAPK通路，请问MAPK通路抑制剂有分种属的吗？除了SIGMA公司的还有哪个公司的比较好啊？谢谢。dyp1998 那位大侠能回答我这个问题啊，谢谢了！dyp1998 顶上去蛋蛋豆豆 我也要买这个抑制剂，不知道是选择PD98059还是U0126xiaoxiaoga selleck chemicals 的抑制剂我用过 觉得性价比要比sigma的高很多，而且送货周期也比较短，前些日子还用了 ...

linjl010 各位专家，我构建了一个表达载体，大小接近9K，目的是想验证猪的该基因表达情况，所以可以转染哪几种细胞，希望用一种转染效率高的细胞。谢谢大家！shylook hela咯章信来 293也成的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

小鱼鱼小溪溪 条带有两条。一条为目的条带，479bp，另一条不知道是不是非特异性条带，241bp，两种条带都很清晰，如图所示:前三个泳道是样品，后三个泳道为内参。循环条件：94℃5 min；94℃30 S，60℃30 s，72℃30S，34个循环；72℃5 min。退火温度提高至62℃，仍然为两条条带，不知道是条件的问题还是引物特异性的问题，请教各位高手帮我解答。济南基美 如果普通PCR定量，可以不用管它，但从位置看是不是污染了内参的引物wgfki ...

xingzhe20100228 各位实验前辈好，本人课题需要检测药物处理后wnt/beta-catenine的活性变化，用Luciferase Reporter方法，如何做？没经验，迫切需要各位高手前辈指点。是不是不用转染，直接加裂解液啊？文献都是一笔带过，晕得找不着北，不胜感激！毕业是老板不急的，怎样做你自由发挥，就这点钱，不够你自己再想办法，真希望有人管哪！毕业在即，要命呢！shylook 文献怎么可能是一笔带过呢多看文献 绝对 ...

huazhan5 有没有自制探针的？而不是去买已经合成好的探针。。。希望可以交流哈~huazhan5 有没有人啊~帮帮我啦。biolinkphilic 可以看看这张帖子http://www.dxy.cn/bbs/thread/13765082其实做探针的进口试剂费用也不便宜。国内现在也有公司可以合成。huazhan5 biolinkphilic wrote:可以看看这张帖子http://www.dxy.cn/bbs/thread/137650 ...

southern 我用一段序列来搜索可能作用的miRNA，结果中出现“ — strand”，这是不是指反义链转录的？那么它们是如何发挥作用的呢，会不会和+ strand 转录的发生互补而作用抵消了呢？295546 你是怎么搜索的？southern miRBase有一个by sequence框，将序列粘贴进去，其他参数都不动，只选择了homo sapiens本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师 ...

whm5869 我构建了一个质粒，包括目的基因片段和一小段启动子，测序结果完全正确，我们实验室的工作人员说理论上应该表达但是我转染细胞做WESTERN鉴定，就是不表达，请问这是为什么啊，谢谢各位大侠了whm5869 我用的是polyjet转染试剂，操作等基本没问题，谢谢大家了pharmaceutic 以前我站构建质粒的时候也遇到过这种问题，最后换了一个载体以后就表达了。最后分析认为不同的基因可能有启动子喜好，一般情况下 ...

兔巴哥 请看下图：图片描述：A diagram of the signaling pathways acting on β-catenin (shown in red) that are involved in breast cancer. The most studied of these is the Wnt pathway, which stabilizes β-catenin by inhibiting its N-terminal phosphorylations and ubiquitination. This allows β-catenin to accu ...