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我是风儿 请教各位大侠：最近准备用腺病毒作为载体，将某受体的hs-RNA 尾静脉注射干扰肝脏组织的该受体表达，好像hsRNA干扰用于动物模型的研究不是太稳定，请问有哪位高人做过类似实验，给予指点：1、这种干扰方法的效率如何；2、这种干扰作用持续的时间？如果想保持这种干扰作用更长时间，需再次注射？请高手给予指点！谢谢师兄师姐们。乐观自信 你好！有个疑问你从尾静脉注射腺病毒怎么能保证在肝脏组织高表达该ShRNA？为何不直接注射到 ...

dengjie19841217 大家能不能帮我看看这张质粒双酶切的电泳图，上方边缘怎么会这么毛糙，本来是要切胶纯化后作插入目的片段的，怕会影响后面的连接，所以没纯化！已经出现两次同样的状况了，之前做的时候都还是很干净的一条带，不知道是怎么回事啊！载体是pGL3-Basic，酶切位点Mlu I和Xho I，酶切2小时后，1%琼脂糖凝胶电泳，80v电压45min。大家快来帮帮我吧falan87 我最近也在做双酶切连接，做了好几次都出 ...

zhoujianheng 求助哪位大侠有完整的雄激素受体（AR）信号通路图，请提供帮助小熊and大熊 楼主现在有了么？能分享一下吗？zhoujianheng 楼主雄激素受体信号通路怎么才能看到呢？candyyoung 楼主如今是否找到？能否共享给晚辈，谢谢感激不尽！ ***版主dachong99留言:园子不允许留邮箱，站内消息沟通即可xvyipeng 求转发雄激素受体（androgen receptor,AR）信号通路图，×××××版主dach ...

钦文 我用人的外周血4ml分离淋巴细胞，计数约400万个细胞，分成两孔种到24孔板中，培养3天后提取淋巴细胞的RNA，由于红细胞较多，提RNA前用红细胞裂解液先处理了细胞的，操作严格按照说明书进行，我用的是Takala的Trizol，500ul，800ul，1ml的量都用过，但是每次做到加入异丙醇离心后均未见沉淀，用DEPC水溶解后跑电泳也没有条带，不知道是什么原因，RNA提不出来，实验没办法进行，着急啊，请大家帮我 ...

hanrui1009 小女子是新手，最近忙于做一个抗病基因的克隆，基因的片段大小7010bp左右，打算采用PCR的方法克隆，Taq LA polymerse和29bp的特异性引物，扩增不出来，请高手指点啊！zjubell 扩不出来太正常了。可能你的模板根本就没有，或者降解，或者表达很低。另一方面，这么长，聚合酶可能在中途就掉下来了。建议你分段扩增。比如分成5－10个PCR，每段扩600－800bp，设计一些overlap的区域。最好 ...

烟雨无心客 请问大家有知道炎症信号通路中TNFa的特异性抑制剂是什么的吗？如果有文献最好。万分感谢！xiaoxiaoga Lenalidomide (Revlimid)Pomalidomide这两个是TNF-ALPHA的抑制剂，xiaoxiaoga References on Lenalidomide (Revlimid): H Quach et al. Leukemia. 2010, 24:22–32 http://en.wikipedia.org/wiki/Lenalid ...

penghu 各位同道老师好.本人近期做了一组肿瘤NimbleGen HG18_CpG_Promo Microarray Methylation芯片筛选，结果出来后，有些问题向大家讨教：问题1：发现有的基因启动子甲基化有多个结果，实验人员说是不同转录本的问题。以CITED1为例：但是我不清楚 1、该基因启动子到底有没有被甲基化；2、只有这三个转录本的结果都显示甲基化了才能认为该基因因启动子甲基化而沉默了吗？问题2：在pubmed上， ...

liuxing0626 各位学长好：我买的ProteinTECH公司的 ERK1 抗体 western blot 条带有两条，公司的说明书也是两条，请问这是个怎么情况？而且我要做ERK1/2。但是ERK2也是单买的，混起来用的话会不会出来3条带了。ERK1产品地址http://www.ptglab.com/Products/ERK1-Antibody-11257-1-AP.htmliuxing0626 123药尊 是一条比较深吧。想完全没有第二条带， ...

飞一闪 本人是全新手，现在手上有一些作为对象的miRNA，想要预测它们的靶基因，具体操作到底应该怎样呢？这段时间经过自己摸索，知道是要用mirbase,tagetscan,starbase来达到目的，也去过这些网站上操作过，但所得结果到底该如何用实在是不知道啊，而且，也不知道自己的这些操作到底有没有意义。虚心求助各位高手，能帮我就下面这个例子解释一下，说说具体流程，感激万分啊！例如：现在想对 let-7 miRNA家族的miR ...

能nca 第一次，自己配了DEPC，还没来得急摇匀，老师就让我们泡上枪头了。实验失败了无数次，要了命了，没找出原因。这次准备重新处理枪头，有几个问题想问问各位师兄师姐：1.装枪头的盒子怎么处理，用DEPC水多擦洗几次烘干行不行？2.那个DEPC水是不是按比例配好之后摇匀一整夜，就可以使用了？3.我把枪头和EP管直接泡在DEPC水里，浸泡24小时候，手带着干净的手套然后一个个的插到枪头盒子里行吗？gjs713 我们这里都是这 ...

zhywang4072 鄙人现在做一180KD的蛋白，之前转PVDF膜用的是100v两个半小时，预染marker转得很漂亮，内参也很不错，但是目标蛋白条带却没有，请教各位大侠，这是什么原因？还有诸位大蛋白转膜时候条件怎样？我用的是湿转，谢谢wodezxn 我觉得100V2h肯定是足够了，没转上应该是你目的蛋白的问题，可能是蛋白表达量太少或者你提蛋白的时间有问题。zhibinx2007 350 mA恒流转2小时就足够了，目标条 ...

jiang104820 请问各位样本在负80度放了一年多，对荧光定量PCR的结果会不会有很大影响啊？我前几天做了荧光定量PCR，对照组的样本是新收的组织，而实验组的样本是一年前收的，跑出来的结果几乎所有指标都跟表型相反，很郁闷啊！求解答！谢谢shylook 跑PCR看看rna降解没jiang104820 shylook wrote:跑PCR看看rna降解没负80度储存是组织块形式储存的，RNA是我做PCR的时候提的，测浓度 ...

gretahill 我用NBCI的BLAST核对引物，下面出来的描述性的格里有accession,description, max score ,total score, query coverage, E value, max ident, links项目，这些都是什么意思？在核对引物可用性时哪些项指标较重要？谢谢qq890914 传个资料给你，自己学吧！gretahill 看中文比看英文舒服多了，非常感谢luwei2004 太好了，正需要这个。谢了！拿走了染景帆 好东西啊 ...

zhll4000 弱弱的问问：我买的miRNA试剂是以nmole为单位的，说明书上说以pmol为单位与lip2000（lip2000以ul为单位）混合，不知道该如何量取pmol？或者pmol可以换算成ul计算吗？急急急。。。。芍药香 1nmol=1000pmol，可以看看总量，计算下浓度，再做稀释。zhll4000 谢谢谢谢，总共是5nmol的miRNA，但还想问下：我就是不知道要用什么仪器来量取这个miRNA？这个要怎么办啊？ ...

wubin6638 我自己配的溶液按的是这样的步骤1.收集400ml菌液的沉淀于50ml离心管中，加入7ml冰预冷的STE，震荡至彻底悬浮。（此时，共收集了4管细菌沉淀）2. 2管合为1管，然后，4000-5000g，4℃离心15min，弃上清，倒置，使液体流净。3.将收集的菌体用8ml溶液I悬浮，混匀。4.加入16ml新鲜配制的溶液II，盖紧离心管盖，温和上下颠倒混匀5-7次，室温放置（最好冰上放置）5min，切忌延长时间，可适当 ...

能nca 各位师兄师姐，我做RNA提取了，很多遍了，到现在也不出结果，不知道哪里出了差错氯仿的保质期是多长时间啊，我师姐说氯仿从08年就买了，会不是时间太长了啊？liubingood 氯仿、异丙醇等这些化学试剂性质比较稳定，通常在说明书上不写保质期的，理论上可以长期保存，但是对于开封和未开封要区别对待。未开封的试剂试剂瓶的密封并不一定很严，多少会受外界水分等影响；一旦开封了就尽早使用，外界污染的可能性就存在了。通常对于这 ...

sun1123moon 我现在做的是真菌DNA提取，后面用来做PCR的模板，用的是生工的提取盒。今天刚刚做了，不知道做的对不对？最后出来的是一点点像白色沉淀似的东西，然后我用TE缓冲液溶解，但是不知道怎么样属于溶解好了。而且如何测定DNA的浓度呢？我用的是液体培养基，但是不知道怎样把菌丝取出来，想请教一下各位，怎样在液体培养基上取出菌丝？Mostino 真菌DNA的溶解和浓度测定应该与质粒一样道理。高速离心或滤膜过滤可 ...

magichunter 目前我想证明某个药物分子抑制了蛋白A和蛋白B之间的相互作用，初步打算用Co-IP的方法验证加药前后两个蛋白的相互作用情况，请问有没有其他的办法也可以证明这个设想呢？aberrant 如果有A、B两个蛋白的荧光质粒可以做一下FRET，目前为止，Co-IP和FRET是最直接的方式，前者量化后者直观shylook 首先做下IP 是比较直接和成本合适的实验FRET做不做倒真无所谓 现在文章很少用倒是可以做个共 ...

13406538020 受体型酪氨酸酶激酶的作用方式有以下几种(1)激活磷脂酶C，(PLC，)介导的膜磷脂磷脂酰肌醇一4，5二磷酸水解并产生细胞内第二信使信号通路；(2)激活磷脂酰肌醇一3激酶(P13K)，①产生脂磷脂酰肌醇一3，4二磷酸或脂磷脂酰肌醇一3，4，5三磷酸信号通路，②产生细胞内强氧化物过氧化氢(H：Oz)信号通路；(3)激活Src激酶等细胞内非受体酪氨酸激酶信号通路；(4)激活小G蛋白Ras-丝裂原活化蛋白激酶(mi ...

xan36 各位大侠，我现在想验证下我的RNA是否为环状RNA。请问有何高招？我能想到的是用RNA酶进行消化，如果被消化了，那么就说明它不是环状的。那么请问，我该选用哪种RNA酶呢？hzfjy 这位大侠，你太牛了，两年前就开始研究环状RNA啦？我是最近刚开始接触的，我也想问这个问题，请问你现在有答案吗？如果有的话，请告之，万分感谢！bingshuangcom8 RNase Rdxy333721 楼上正解vanasil nature上的文 ...