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        14kd 蛋白wb的有关问题

        丁香园论坛

        2483
        求助:
        构建好了重组腺病毒进行蛋白表达,分子量是14kd,5%的浓缩胶70v,12%,或15%的分离胶110v,跑90min。湿转:100v,90min。封闭用5%的脱脂奶粉,封闭3h(因为背景深,以为封闭久会好些)。一抗1:3000,4度过夜,二抗1:5000,孵育1h,洗膜都是用TBST漂洗15min ×4次。但是显影后背景特别深,虽然可以看见目的条带,但还是有一些非特异性的条带出现,不知道是封闭出问题还是一抗浓度过高。
        各位大侠,请多多指教!急啊~~~
        二抗稀一点试试。封闭没关系。一抗就难说了 可能就是很多杂带
        ecl显影液不要加太多,整个膜都湿润了即可。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        14kd 蛋白wb的有关问题

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