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        p-p38的Wb问题

        丁香园论坛

        4924
        大家好,本人最近一直在做p-p38的磷酸化,但是一直都做不好。希望各位大侠帮助解决:
        蛋白上样量80-100ug,半干转膜70min,5%BSA封闭70min,一抗CST(#9211) 1:500加,4℃孵育过夜,二抗1:8000加室温70min。曝光出的结果很不好,杂带很多,也分析不出那条是目的条带,且没有趋势,见下图

        p-p38的Wb问题

        p-p38的Wb问题

        p-p38的Wb问题
        1、上样量80-100太大了,但条带出来很浅,是不是定量有问题或者抗体有问题

        2、背景太高,增加封闭时间和洗膜次数

        3、杂带很多,抗体特异性不高
        我最近做过CST的p-p38,1:800稀释,效果不错。5%牛奶封闭90min,抗体孵育过夜。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        p-p38的Wb问题

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