方案14 用 GelCode 磷蛋白染色试剂盒对磷蛋白进行染色实验

1.将凝胶放入盛有 50 ml 水的平皿中，在往复式或定轨式摇床上摇动凝胶 1Omin。

2.将凝胶转移到盛有 25 ml 磺基水杨酸溶液的平皿中，摇动 15 mm。

3.再将凝胶放在 25 ml 含氯化钙的磺基水杨酸溶液中，在摇床上摇动 30 min。

4.迅速用清水洗涤凝胶表面以去除连接在其上的氯化钙。

5.将凝胶转移到 25 ml 0.5mol/L NaOH，用盖子将平皿盖上，在 65°C 下保温 20 min。

6.再将凝胶放入 25 ml 钼酸铵溶液中，在摇床上摇动 lOmin。

7.重复步骤6。

8.将凝股转移到 25 ml 含硝酸的钼酸铵溶液中，在摇床上摇动 20 min。

9.将凝胶放人甲基绿溶液中，在摇床上摇动 20 min。

10.进行脱色，将凝胶转移到 25 ml 硫代硫酸钠溶液，在摇床上摇动 15 min。

11.重复步骤10，此时可以看见磷酸化蛋白的绿色点。

12.为了使凝胶完全脱色，将其放人 25 ml 的 7% 乙酸中，在摇床上摇动过夜。在脱色期间，当溶液变绿时，换一次乙酸溶液。

13.在磷酸化蛋白呈现颜色之后，用考马斯亮蓝染凝胶上的总蛋白。