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        细菌基因组DNA的微量提取法

        互联网

        1399

        本方法通过SDS裂解细胞,蛋白酶降解蛋白 ,CTAB去除多糖成分。

        一:仪器:同方法一

        二:试剂:TE、TAE缓冲液;10%SDS;5M NaCL;

        20mg/ml蛋白 酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL  4.1gNaCL 溶于80ml水中,缓慢加入10gCTAB,加热溶解);25/24/1,酚/氯仿/异戊醇; 24/1,氯仿/异戊醇;异丙醇;70%及100%乙醇

        三:操作

        1.5ml  对数生长期细菌细胞

        离心,5000rpm,1min

        沉淀

        溶于500μl  TE缓冲液中混匀。

        30μl 10%SDS,3μL蛋白 酶K,混匀,37℃,1小时。

        100μl NaCL(5M)  混匀。

        80μl的CTAB/NaCL,混匀;65℃ 10min(可不做)。

        加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心12000rpm,4-5min

        取上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。

        注意

        1.此步操作后,离心管中NaCL的浓度不应低于0.5M,否则DNA将与CTAB共沉淀。

        2.本法适用于从多糖含量高的样品中提取DNA。对于菌体样品,通过此流程,可以获得较为完整的DNA分子。

         

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