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        方法二:细菌基因组DNA的微量提取法

        互联网

        1064

         

        本方法通过SDS裂解细胞,蛋白酶降解蛋白,CTAB去除多糖成分
        一:仪器:同方法一
        二:试剂:TE、TAE缓冲液;10%SDS;5MNaCL;
        20mg/ml蛋白酶K;CTAB/NaCL溶液(10% CTAB,0.7M NaCL  4.1gNaCL 溶于80ml水中,缓慢加入10gCTAB,加热溶解);25/24/1,酚/氯仿/异戊醇; 24/1,氯仿/异戊醇;异丙醇;70%及100%乙醇
        三:操作
        1.5ml  对数生长期细菌细胞
                   离心,5000rpm,1min
                
        沉淀
                   溶于500μl  TE缓冲液中混匀
                   30μl 10%SDS,3μL蛋白酶K,混匀,37℃,1小时
                   100μl NaCL(5M)  混匀
                   80μl的CTAB/NaCL~undefined混匀;65℃ 10min(可不做)
                   加入等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,
        离心12000rpm,4-5min
                取上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。
        注意 1,此步操作后,离心管中NaCL的浓度不应低于0.5M,否则DNA将与CTAB共沉淀。
          2,本法适用于从多糖含量高的样品中提取DNA。对于菌体样品,通过此流程,可以获得较为完整的DNA分子。

         

         

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