• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        GST-融合蛋白的表达与纯化

        互联网

        12729

        原理

        GST 纯化系统是利用GST (glutathione-S-transferase )融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化 。1ml树脂大约可结合5-8 mg融合蛋白,并可反复使用数次。试剂u IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2g IPTG 溶解入10ml 水,过滤除菌,分装,-20℃保存。u Lysis buffer (50ml)1)2.5ml 1 M Tris,pH8.0 2)0.1ml 0.5ml EDTA 3)0.292g NaCl4)0.5ml Triton X-100 5)0.25ml 1M DTT u Elution buffer 1)0.615g glutathione 2)10 ml 1M Tris,pH8.0 3)90ml distilled water .

        操作步骤

        1)挑一个克隆至2ml LB液中(Amp+ )

        2)37℃振摇至OD600值约为0.6

        3)将2ml菌液加入100 ml LB中

        4)37℃振摇至OD600值约为0.6

        5)加入IPTG至终浓度为1mM

        6)继续摇3~4h

        7)离心(5000 rpm,5min,4℃)

        8)用10×柱体积的lysis buffer悬浮细菌

        9)超声破碎细胞

        10)离心(12,000rpm,15min,4℃),取上清

        11)用滤纸过滤

        12)加0.5 ml 50%谷胱甘肽琼脂糖beads于层析柱

        13)5×柱体积的lysis buffer洗层析柱

        14)样品过柱

        15)5×柱体积的lysis buffer洗层析柱

        16)3×柱体积的elution buffer洗脱蛋白

        17)收集蛋白:0.5ml/管 18)取20ml样品SDS-PAGE鉴定可以在buffer里增加点蛋白酶抑制剂,防止蛋白的降解。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序