细胞染色制片方法

1、   取对数生长期细胞一个T75或T25瓶。
2、   将培养基换成10ml DMEM(H)+10%FBS+0.1ug/ml秋水仙素的培养基，处理1~2小时。
3、   将细胞培养液倒掉，马上加入3~4ml 0.1%胰蛋白酶，并立即摇晃0.5~1min。当在显微镜下看到分裂相细胞脱壁后，马上加入终止液终止消化，并将分裂相细胞收集在一个15ml的离心管中，并在1200r/min离心4min。
4、   将上清液倒掉，剩余50ul左右的液在管中，并轻微震动，使细胞沉淀重新悬浮。
5、   加入10ml的低渗液（0.075M KCL），第一毫升要逐滴加入，并边加边摇晃。
6、   37℃水浴中低渗30min。
7、   再加入1ml冰冷的固定液（甲醇：乙酸=3：1 的混合液），并马上摇匀，离心，1000r/min、10min。
8、   同步骤4。
9、   加入10ml冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。
10、  室温下固定30min，然后离心，1000r/min、10min。
11、  同步骤4。
12、  加入10ml冰冷的固定液，第一毫升要逐滴加入，边加边摇晃。
13、  室温下固定15min，然后离心，1000r/min、10min。
14、  重复步骤11~13一次。
15、  将离心后的上清液倒掉，并加入50~100ul的新鲜固定液重悬细胞。
16、  滴片（玻片要求是湿冷的干净的，滴片高度要大于30cm。玻片倾斜角度15~30度左右）
17、  镜检。