- ￥2135
- 万类生物
- 中国
- WLA106a
- 2025年12月26日
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-20℃及4℃
- 规格：
20T
万类生物试剂促销：试剂盒8折优惠，细胞染色质免疫共沉淀（ChIP）-20T 原价2135元，现价1708元。
产品名称：细胞染色质免疫共沉淀（ChIP）试剂盒
产品概述：染色质免疫沉淀技术（chromatin immunoprecipitation assay, ChIP）作为最佳的研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法，它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物，并将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过免疫学方法沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。
该产品被引用文献（仅展示部分）：
1、 Pan M; Luo M; Liu L, et al., EGR1 suppresses HCC growth and aerobic glycolysis by transcriptionally downregulating PFKL. J Exp Clin Cancer Res 2024, 43 (1), 35.
IF: 7.73 Year: 2020 PMID：33305374
3、 Zhang X; Liu L; Liu X, et al., Chidamide suppresses adipogenic differentiation of bone marrow derived mesenchymal stem cells via increasing REEP2 expression. iScience 2023, 26 (3), 106221.
操作流程：
2. 终止交联：加1M 甘氨酸1.26ml，使其终浓度为0.125M，室温培养5min。
3. 吸尽培养基，用预冷的PBS洗两次后，加适量蛋白酶抑制剂（2ml PBS中加入5µl 蛋白酶抑制剂），用细胞刮收集细胞，2000rpm，4℃离心5min。
4. 弃上清，加入1ml Buffer A，冰上放置10min，3000-5000rpm离心5min。
5. 弃上清，加入400µl Buffer B（每100µl Buffer B中含有106细胞）重悬后加入5µl 蛋白酶抑制剂。
6. 超声破碎。一般来说，300W超声10s，间隔30s，12次。12000rpm，4℃离心20min。取20µl上清电泳检测，抹带集中在500-1000bp左右即可。
7. 样品分成三组，每组100µl，A：实验组； B：阳性对照组；C：阴性对照组，剩余样品可放置-80℃保存。
8. 在三组样品中分别加入900µl Chip Diluiton Buffer。
9. 准备ProteinA beads，用1ml PBS 清洗三次（3000rpm离心1min）后保存备用，此步可提前准备。
10. 三组样品中各加入60 µl ProteinA beads， 4℃颠倒混匀1-2h。
11. 混匀后4℃静置10min，3000rpm离心1min。
12. 取上清，每组样品取20µl 进行 Input实验，-20℃保存。
13. 实验组中加入1-10µg 抗体；阳性对照组加入1µg RNA Polymerase II抗体；阴性对照组加入1µg 正常血清IgG，4℃颠倒混匀过夜。
14. 三组样品中再加入60µl ProteinA beads， 4℃颠倒混匀1-2h。
15. 洗涤ProteinA beads 依次用下列溶液清洗沉淀复合物。清洗步骤为：加入1ml 预冷溶液，在4℃混匀10min，3000rpm离心1min，除去上清。
a. Low Salt Wash Buffer，1次。
b. High Salt Wash Buffer，1次。
c. LiCl Wash Buffer，1次。
d. TE Buffer，2次。
16. 每管加入100µl Elution Buffer（100µl 10%SDS+100µl 1M NaHCO3+800µl ddH2O），室温颠转10min后3000rpm离心1min，收集上清。重复洗脱1次，终体积200µl。
17. 取出Input实验样品，室温融化后加入180µl Elution Buffer。
18. 解交联。每管中加入8µl 5M NaCl，混匀，65℃解交联过夜。
19. 解交联结束后，每管加入1µl RNaseA，37℃孵育1h。
20. 每管加入4µl 0.5M EDTA，8µl 1M Tris-HCl（PH=6.5），1µl Proteinase K，45℃孵育2h。
21. DNA片段回收（WLA092a PCR纯化试剂盒）。
22. 对照品的PCR。
23. 取出每种PCR反应物10μl，采用4%琼脂糖凝胶电泳（采用100bp DNA marker）进行分析。
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文献和实验1、Zhang X; Liu L; Liu X, et al., Chidamide suppresses adipogenic differentiation of bone marrow derived mesenchymal stem cells via increasing REEP2 expression. iScience 2023, 26 (3), 106221.
PubMed: 36879811
2、Zhang W; Wang Q; Xing X, et al., The antagonistic effects and mechanisms of microRNA-26a action in hypertensive vascular remodelling. Br J Pharmacol 2021, 178 (5), 1037-1054.
PubMed: 33305374
了编码 HA-BDCA-2 载体的小鼠 B 前体细胞后，提取的蛋白使用 SDS-PAGE 的方法进行检测。 蛋白免疫共沉淀（co-IP）与染色质免疫共沉淀（ChIP） μMACS Protein A/G MicroBeads 专为蛋白质免疫共沉淀分析而开发，免疫复合物 30 分钟即可形成并得到磁性分离。 在强磁场的分离柱中进行润洗，可保证背景充分去除，即便是弱结合的蛋白复合物依然可得到充分分离。传统免疫共沉淀工作流程需要抗体孵育过夜，相比之下 MACS Techology 可令实验时间缩短
，将 CUT&RUN 技术升级到单细胞水平，并应用于早期胚胎研究。 2019 年 Henikoff 等发明 CUT&Tag ，使用带有接头的 Tn5 转座酶替代 MNase ，简化实验操作，将细胞量从 104 级别降到 60 个细胞甚至单细胞。 2.蛋白质-DNA 互作技术概述 ✦染色质免疫共沉淀（ChIP）: ChIP 是全基因组范围内检测蛋白-DNA 互作的标准方法，该技术由 Orlando 等于 1997 年创立[1]。 图 1：ChIP 基本原理图[1] ✦ ChIP
染色质免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation，ChIP）是一种用于研究目的蛋白在染色质上定位的技术。ChIP 的原理是通过甲醛处理细胞固定 DNA 和蛋白，然后提取染色质，使用超声或酶解将染色质剪切成小片段。 之后使用结合在染色质的目的蛋白或组蛋白修饰特异性抗体富集 DNA 片段。富集的 DNA 片段可以通过 PCR，DNA 芯片或测序进行分析。虽然原理看起来很简单，但 ChIP 是一项非常具有挑战的技术，很多因素都可能导致实验
