酶切、回收、连接 常识

 

回收与连接

 

 

 

 

一．单选题

 

1 ．用DEAE 膜片法回收电泳分离的DNA 片段时，在紧靠目的DNA 片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE 纤维素膜，该裂缝长度与DNA 条带相比应（C ）

 

A ． 略短    B. 等长   C. 略长   D. A 或B 都可   E . A 、B 、C 都可

 

2 ．用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA 片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（B ）

 

A ．透析膜要接触DNA 区带一侧的胶缘 。

 

B ．透析膜不能接触DNA 区带一侧的胶缘 。

 

C ．透析膜要接触DNA 区带相对一侧的胶缘 。

 

D ．透析膜不能接触DNA 区带相对一侧的胶缘 。

 

E ．随意插入槽中即可。

 

3 ．在回收DNA 片段时，观察电泳结果为尽量减少对DNA 的照射损伤应使用（A ）

 

A ．长波长紫外  B. 短波长紫外  C . 长波长红外  D. 短波长红外           E.  ABCD 都不可

 

4 ．DNA 回收时，如要除去EB （溴化乙锭）可用下列那种试剂（ A ）

 

A ．正丁醇   B. 苯酚   C. 氯仿    D. 异戊醇    E.  乙醇

 

5 ．在DNA 分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（ E ）

 

A ．控制反应温度  B. 控制酶的反应时间   C.  控制DNA 聚合酶的用量

 

D. 控制反应PH    E. 限制dNTP 的种类

 

6 ．下列关于平末端连接的说法正确的是（ B ）

 

A ． 同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。

 

B ． 加入凝聚剂PEG8000 可促进平末端连接。

 

C ． 平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。

 

D ． 平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。

 

E ． 平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。

 

7 ．用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（ E ）

 

A ．核酸内切酶    B. 核苷酸激酶    C. 核酸外切酶    D. 末端转移酶     E.  碱性磷酸酶

 

8 ．分子克隆中用T 载体主要是与下列哪种产物连接（ D ）

 

A ．单酶切产物      B. 双酶切产物      C. 同裂酶产物     D. PCR 产物   E. 酶切后形成的平末端产物

 

9 ．采用BamH I 单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（ D ）

 

A ． 65 ℃处理10 分钟使BamH I 灭活。

 

B ． 用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。

 

C ． 电泳检测酶切结果。

 

D ． A 、B 、C 都正确。

 

E ． 只有A 、C 正确。

 

10 ．粘末端连接的优点是操作简便且（ C ）

 

A ．可产生新的酶切位点    B. 载体易自身环化  C. 易于回收片段

 

D ．具有方向性   E. 选时更简便