CTAB法提取植株基因组DNA

（1）采摘健康幼叶作为提取植株基因组DNA的材料，用蒸馏水洗净，用纸吸干。
（2）取新鲜的叶片150mg置于1.5ml离心管中，使用MM301细胞破碎仪进行研磨破碎。（若样品暂时不用，应保存于-80°C）
（3）加入已预热的2×CTAB提取缓冲液700µl浸透粉末并倒转离心管，使粉末充分散开，于65℃水浴60 min，其间轻柔混合2-3次。（65°C预热CTAB，准备1000μl枪头，新离心管，镊子，厚手套，-20°C预冷异丙醇、无水乙醇）
（4）取出离心管，冷却至室温，加入700µl的氯仿/异戊醇（24/1），轻缓颠倒混匀，静置10 min。
（5）13000rpm离心10min。（离心温度不可过低，CTAB低于15°C会析出沉淀）
（6）取上清600µl转移至新离心管中，加入等体积的氯仿/异戊醇(24/1)，轻缓颠倒混匀，室温放置10min。（取上清时一定要小心，不可将杂质混入，上清不够则少提）
（7）13000rpm离心10min，取上清400µl转移至新离心管中，加等体积已预冷的异丙醇，保存于-20℃，静置20 min。
（8） 13000rpm离心10min，将离心管倒置于吸水纸上，控干上清，用600µl 70%的乙醇洗涤沉淀2次，室温下微干。加入300µl去离子水溶解沉淀。（沉淀一定要充分溶解，可用枪头将沉淀从离心管底部弹起，放于4°C 0.5h—1.0h）
（9） 加入1µl RNase（10mg/ml）置于37℃水浴60 min，每个离心管加300µl去离子水，加入等体积的氯仿/异戊醇抽提2次。（此步抽提很重要，一定要避免分离层中的白色薄膜吸入枪头，否则所得到的DNA中会含杂质而呈现乳白色）
（10） 吸取上清400µl 转入新离心管，加入上清体积1/10的3mol/LNaAC溶液，2.5倍体积的预冷无水乙醇沉淀DNA，置于-20℃，20 min左右，12000rpm离心10min，弃上清。（此时沉淀的DNA应为无色胶状）
（11）用600ul 70%的乙醇洗涤沉淀2次，通风干燥或者自然干燥。（若DNA为无色，用乙醇洗涤时应小心，以免将DNA倒出；可用小号枪头将部分乙醇吸出后再自然干燥，以便加快干燥速度）
（12）加入30µl TE缓冲液溶解DNA，4℃保存备用。（-20°C长期保存）
 

所需溶液的配制

（1）0.5mol/L EDTA溶液
400mlddH ₂ O中加入93.05g Na ₂ EDTA，完全溶解后使用NaOH调节至PH=8.0，加ddH ₂ O定容至500ml。（4°C保存）
（2）1mol/L Tris·Cl溶液
400mlddH ₂ O中加入60.50g Tris，完全溶解后使用浓盐酸调节至PH=8.0，加ddH ₂ O定容至500ml。（4°C保存）