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        CTAB-PAGE实验

        相关实验:单向聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

        最新修订时间:

        原理

        该方案由方案 蛋白质的SDS-PAGE实验 中介绍的标准 SDS-PAGE 衍变而来。虽然在进行变性凝胶电泳时多选用 SDS-PAGE, 但阴禽子去污剂 SDS 仍然存在一些局限。例如,SDS 在低温下会结晶,某些情况下还会使蛋白质聚集或沉淀,而且有些蛋白在 SDS 凝胶中不能很好地溶解或者出现异常的迁移现象。这些情况下,可选择采用阳离子去垢剂进行 PAGE。这里讲到的不连续、阳离子去垢剂 PAGE 方法参照了 Atkins 等(1992)。这个系统中使用的是阳离子去垢剂 CTAB(十六烷基三甲基溴化铵),其浓缩胶以两性离子精氨酸(作为浓缩溶液)和 tricine[N-三(羟甲基)甲基甘氨酸] 为缓冲体系。如果样品没有经过煮沸和外加还原剂,一些由 CTAB 电泳系统分离的蛋白质仍保持其酶学活性。

        材料与仪器

        步骤

        1.按照 蛋白质的SDS-PAGE实验 制备凝胶,但浓缩胶和分离胶用本文配方。

        2.往上下缓冲液槽中注满 IXtricine 电泳缓冲液。

        3.室温下将蛋白样品溶解在 50ul CTAB 上样缓冲液中,终浓度为 5 mg/ml。如果不考虑样品的生物学活性,可将其在有 2% 巯基乙醇存在下置沸水浴中加热 3 min。

        4.将样品加人上样孔。

        5.100V 开始浓缩胶部分的电泳,注意电泳是从阳极到阴极。

        6.当样品迁移至分离胶时,将电压升至 150V。

        7.当染料前沿到达凝胶底部时,关掉电源,停止电泳。

        来源:丁香实验

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