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        CTAB法

        相关实验:植物组织制备基因组 DNA 实验

        最新修订时间:

        原理

        加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。

        材料与仪器

        步骤

        1.  在所需量的CTAB抽提液中加入2-巯基乙醇,使终浓度达2%。将此溶液及CTAB溶液加热至65℃。
         
        2.  用液氮(-196℃)或干冰(-78℃)冷却粉碎器/匀浆器,将植物组织粉碎成为细粉。

        3.  将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。

        4.  往粉碎的组织中加人预热的2-ME/CTAB,混合使之充分湿润,于65℃温育10~60 min,混匀。
         
        5.  用等体积的24:1氯仿/辛醇或氯仿/异戊醇抽提匀浆液,颠倒使充分混合。

        6.  于4℃7 500 g 离心5 min,回收上(水)相。

        7.  在回收的上层相中加入1/10体积的的65℃的CTAB溶液,颠倒混匀。

        8.  用等体积的氯仿/辛醇抽提,混匀,离心,回收上(水)相。
         
        9.  加入正好1体积的CTAB沉淀液,颠倒混匀,如果沉淀可见,继续做步骤10,否则于65℃温育30min。

        10.  于4℃,500 g 离心5 min。
         
        11.  移出上清,但不要丢弃,用高盐的TE缓沖液重悬沉淀。

        12.  如果沉淀难于重悬,于65℃温育30 min,重复直至所有的或大部分沉淀溶解。

        13.  加入0.6体积的异丙醇沉淀核酸,充分混匀,于4℃,7 500 g 离心15min。

        14.  用80%乙醇洗涤沉淀物,干燥,用尽可能少的缓冲液重悬。

        来源:丁香实验

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