• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        正常大鼠前脂肪细胞的培养

        互联网

        2303
              实验材料:
              1. 细胞来源:4周龄雄性Wistar或其它品系大鼠;
              2. 清洗液:不含Ca2+ 和Mg2+ 的PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.4;
              3. 消化液:2mg/ml胶原酶溶液。用DMEM培养液配制,并加入牛血清白蛋白20mg/ml;
              4. 培养液a:DMEM培养液,10%胎牛血清、100IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素;
              5. 培养液b:在培养液a中补充生物素33μmol/L与泛酸盐(pantothenate)17μmol/L;
              6. 培养液c:基础培养液为DMEM/Ham F12(1:1,V/V)混合培养液,加入NaHCO3 15mmol/L、HEPES 15mmol/L,pH7.4。再加入生物素33μmol/L与泛酸盐17μmol/L及100IU/ml青霉素、50μg/ml链霉素;
              7. ITT培养液:在培养液c的基础上添加胰岛素5μ g/ml、转铁蛋白10μg/ml和三碘甲腺原氨酸(T3 )200pmol/L;
              8. 筛网:孔径为25μm的尼龙网筛。
         
              实验方法:

              1. 取材
              ① 取用普通食物喂养的4周龄雄性大鼠,乙醚麻醉后断头处死;
              ② 在无菌条件下从附睾周围切取脂肪垫,放入培养皿中。尽量除去血管。然后用清洗液冲洗3次;
         
              2. 分离细胞
              ①  充分剪碎所取脂肪细胞。然后放入消化液中,37℃水浴中振荡消化40min;
              ② 将含有细胞和残余组织块的消化液倒入加有培养液a的烧杯中,用吸管反复吹打。然后通过孔径为25μ m的尼龙网筛。分别收集滤液和未滤过的组织块;
              ③ 将滤液以600g离心5min,弃上清液。在管中加入培养液b,制成SV细胞悬液,暂存入4℃冰箱中;
              ④ 合并两次制备所获的SV细胞悬液。用吸管吹打混匀。取少量SV细胞悬液,计数细胞。注意在计数时不要计入血细胞。根据需要调节细胞密度;
         
              3. 原代培养
              ① 以104 个/cm2 的密度将细胞接种于培养皿中,加入培养液b。于37℃、3.5%CO2 培养箱中培养12—24h;
              ② 在细胞贴壁后,用培养液c清洗2次。然后加入培养液c过度培养1h;
              ③ 弃瓶中的培养液c,用PBS洗细胞2次;
              ④ 以后用ITT培养液维持培养。每3d换液一次。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序