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        请教RIPA的配制

        丁香园论坛

        4226
        我的实验:将400ul的matrigel胶注入小鼠皮下形成的那么一个黄豆大的像凝胶一样的东西,会有血管长入。然后活体动物注射荧光素标记的Isolectin,可与新生血管内皮细胞结合,然后取出组织,溶解在RIPA裂解液中,匀浆后离心取上清再测定荧光强度。
        该操作原文献只说用RIPA裂解液,没有给出成分。我用“RIPA”这个词检索,从一篇无关的英语文献中找到了配方。国内再查RPIA,共查到3-4种,大体成分均与英文文献相似,互相差1、2种成分或个别成分用量有一点差异,国内文献都是用来做Western的,而做Western我所在实验室只加PMSF, 没有leupetin、aprotinin、chynostatin等成分,配方就更简单了。不知我所在实验室只加PMSF,我的实验是否可用,省去aprotinin、leupeptin,经费是一方面,主要是眼下购买时间要1月以上,着急。
        以下是我查到的几种RIPA的配制:
        (1)英文:100μl RIPA buffer (20 mmol/L Tris-HC1, pH 7.4, 150 mmol/L NaC1, 1mmol/L EDTA, 1% NP-40, 1 mmol/L Na3VO4, 1 mmol/L PMSF, 5μg/ml leupetin, 5μg/ml aprotinin, 5μg/ml chynostatin).
        After incubation for 30 min on ice, the lysis suspension was centrifuged at 12000r/min for 15 min at 4℃, and the supernatant was transferred to another tube and stored in aliquost......
        (2)细胞溶于RIPA缓冲液(1×PBS,体积分数为1%NP-40,5g/L脱氧胆酸钠,1g/LSDS,1mmol/LPMSF,10μg/ml抑肽酶,10μg/ml抑酶醛肽)20分钟(0℃),离心上清获蛋白。Bio Rad试剂盒进行蛋白质定量。
        (3)培养皿中加入1ml预冷的RIPA裂解缓冲液(Tris-HCl 50mmol/L pH8.0;NaCl 150mmol/L;DTT 1mmol/L;EDTA 0.5mmol/L;NP-40 1%;脱氧胆酸钠 5g/L;SDS 1g/L;PMSF 100mg/L;Leupeptin 2mg/L;钒酸钠 100μmol/L),冰浴条件......
        (4)RIPA缓冲液(Tris-HCl 50mmol/L pH8.0;NaCl 150mmol/L;NP-40 1%;SDS 1g/L;0 5%DOC, EDTA 2mmol/L;PMSF 1mmol/L;Leupeptin 10umol/L;pepstatinA1umol/L;aprotinin 1ug/ml)裂解细胞,冰浴30min......
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