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        ATP储存液的配制

        相关实验:用蛋白质底物进行蛋白质激酶分析实验

        最新修订时间:

        材料与仪器

        试剂、试剂盒

        步骤

        一、Mg-ATP 储存液的配制

        ATP 买来时通常是钠盐。大多数激酶需要 ATP 镁盐作为高效底物。有时可以用锰代替镁。

        1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO4

        2. 20 mmol/L Na2-ATP

        以 1:1 的比例混合这两种溶液,测 pH 值。慢慢将 pH 值调至 pH 7.4。如果出现沉淀,应继续搅拌,并要保持 pH 值在 pH 7.4。这就配成了 10 mmol/L 的 Mg-ATP 储存液。将溶液分成小份保存于 -20℃,可以放一年以上。

        二、[γ-32P] ATP 使用液的配制

        [γ-32P] ATP 供应商有 Amersham Int、NEN 和 ICN;通常可以买到不同比活性的 [γ-32P] ATP。适宜使用的比活性是 3000 Ci/mmol,通常刚买来时的浓度是 10 mCi/ml。Amersham’s Rerfivue [γ-32P] ATP 溶液用起来很方便,因为它可以保存于 4℃ 而不是 -20℃。


        来源:丁香实验

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