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        【求助】有关流式PI染色测量细胞周期

        丁香园论坛

        3148
        各位好,拜托大家给点建议
        我最近在做FCM,主要是测药物对黑色素肿瘤细胞的生长周期的影响,用的方法是FCM PI染色的方法。
        但是70%的乙醇固定之后,离心后可以看到有大量的细胞贴壁,把上清吸出去以后,可以看到沉淀留在底部,但是加入了PBS吹打均匀以后再离心。不管怎么样延长时间,或加大转速,就是没有细胞离到壁上,请问大家,这是怎么回事。应该如何避免上面这样的问题出现呢?!
        固定的时候出问题了
        细胞估计已经破裂
        固定时候应该缓慢添加固定液
        有的时候固定液就是用PBS和无水乙醇配置的。
        我做的步骤:接种适当浓度细胞于培养皿中,培养过夜后,经0.25%胰蛋白酶消化,冷磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤后离心,用70%(体积分数)预冷乙醇悬浮细胞于-20度固定过夜后,离心收集细胞,用PBS洗3次去除乙醇,细胞团重悬于PBS中,用20 μg/ml含RNaseA的碘化丙啶PI染色液避光染色30 min,经100目尼龙网过滤后进行FCM 检测。

        根据你出现的问题做的推测:
        1、离心速度是否过大导致细胞破裂?
        2、PBS和乙醇溶液没错?

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】有关流式PI染色测量细胞周期

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