简介
流式细胞仪（flow cytometer，FCM）又称荧光激活细胞分类仪（fluorescence activited cell sortor，FACS），由光学系统、电子控制系统以及计算机分析系统三个部分组成。
用途
流式细胞仪细胞生物学、免疫学、肿瘤生物学、病理学以及临床诊断中得到广泛应用。
材料与仪器
器材：
① 移液器
② 枪头
③ 离心管
④ 离心机
⑤ 流式细胞仪
⑥ 水浴锅
试剂：
① 0.25% 胰蛋白酶溶液
② PBS
③ RNA 酶
④ PI 染液
⑤ 70% 乙醇溶液
⑥ PI 染液：15 mg Pl；枸橼酸钠 0.1 g；NP-40, 0.3 ml；加蒸馏水至 100 ml。
步骤
流式细胞仪检测细胞周期的基本过程可分为如下几步：
A. 取培养细胞 1 瓶，用胰蛋白酶消化，取 2×105～1×106/L 个细胞，用 PBS 制备成细胞悬液。
B. 1000 g 离心 10 min，弃上清液。加入 -20 °C 预冷的 70% 乙醇固定液重悬细胞，固定 30 min。
C. 轻弹管壁使沉淀松散，1000 g 离心 10 min 后，用 PBS 离心洗涤 2 次。
D. 离心后，用 RNA 酶消化细胞，室温 30 min。
E. 重复步骤 C。
F. 用 PI 染料避光孵育细胞 30 min。
G. 同步骤 C 用 PBS 洗涤细胞。如果不能立即上机检测，可以 4 °C 冰箱保存待测，最好在 5 h 之内或者当天内完成检测。
H. 选择最低上样速度，在流式细胞仪 488 nm 激发波长下检测红色荧光。
注意事项
1. PI 为致癌物质，避免用手直接接触。
2. 细胞数目应该达到 2x104 个，细胞数目过少影响实验结果的准确性。
3. 在制备时，离心次数不宜过多，防止细胞丢失。
4. 以正常淋巴细胞调试流式细胞仪。
来源：丁香实验
