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        HE染色石蜡切片的制作的七个步骤

        互联网

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        设备用具:切片机、恒温箱、溶蜡箱、玻璃缸、载玻片、盖玻片、手术刀片、镊子、包埋盒。

        试 剂 :10%福尔马林、酒精、二甲苯、固体石蜡、苏木精、酸水、氨水、酒精伊红染色剂型、加拿大树胶

        (二)HE染色石蜡切片的制作过程

        步骤一:取材与固定:

        取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。

        步骤二:脱水透明:

        一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。

        步骤三:浸蜡包埋:

        将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋:先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入已溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。

        步骤四:切片与贴片:

        将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。

        步骤五:脱蜡

        常用HE染色,以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察。苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染色。

        步骤六:染色

        HE染色过程是:
        ①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
        ②酸水及氨水中分色,各数秒钟。
        ③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。
        ④入70%和90%酒精中脱水各10分钟。

        ⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

        步骤七:脱水透明:

        染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。

        步骤八:封固:
        将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用。

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