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        求问 脂肪组织石蜡切片HE染色步骤

        相关实验:免疫组化

        user-title

        冬虫夏蝉

        脂肪组织石蜡切片HE染色到最后脱水步骤的时候整个组织都完全脱片,要怎么办呀?

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        3 个回答

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        切好片捞片的时候贴平整,烤片时间一定要够,还有就是如果是间隔一段时间再做染色的一定要二次烤片。

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        石蜡切片HE染色(常规HE染色)步骤:

          (1)二甲苯Ⅰ:5~10min;

          (2)二甲苯Ⅱ:5~10min;

          (3)无水乙醇Ⅰ:1~3min;

          (4)无水乙醇Ⅱ:1~3min;

          (5)95%乙醇Ⅰ:1~3min;

          (6)95%乙醇Ⅱ:1~3min;

          (7)80%乙醇:1min;

          (8)蒸馏水:1min;

          (9)苏木精液染色:5~10min;

          (10)流水洗去苏木精液:1min;

          (11)1%盐酸-乙醇:1~3s;

          (12)稍水洗:1~2s;

          (13)返蓝(用温水或1%氨水等):5~10s;

          (14)流水冲洗:1~2min;

          (15)蒸馏水洗:1~2min;

          (16)0.5%伊红液染色:1~3min;

          (17)蒸馏水稍洗:1~2s;

          (18)80%乙醇:1~2s;

          (19)95%乙醇Ⅰ:2~3min;

          (20)95%乙醇Ⅱ:2~3min;

          (21)无水乙醇Ⅰ:3~5min;

          (22)无水乙醇Ⅱ:3~5min;

          (23)石炭酸-二甲苯:3~5min;

          (24)二甲苯Ⅰ:3~5min;

          (25)二甲苯Ⅱ:3~5min;

          (26)二甲苯Ⅲ:3~5min;

          (27)中性树胶封固。

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        骤一:取材与固定:

        取动物新鲜组织块(一般厚度不超过0.5厘米)投入预先配好的固定液中(10%福尔马林,Bouin氏固定液)使组织、细胞的蛋白质变性凝固,以防止细胞死后的自溶或细菌的分解,从而保持细胞本来的形态结构。

        步骤二:脱水透明:

        一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂,逐渐脱去组织块中的水份。再将组织块置于既溶于酒精,又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明,以二甲苯替换出组织块的中酒精,才能浸蜡包埋。

        步骤三:浸蜡包埋:

        将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中,放入溶蜡箱保温。待石蜡完全浸入组织块后进行包埋:先制备好容器(如折叠一小纸盒),倒入已溶化的石蜡,迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。冷却凝固成块即成。包埋好的组织块变硬,才能在切片机上切成很薄的切片。

        步骤四:切片与贴片:

        将包埋好的蜡块固定于切片机上,切成薄片,一般为5—8微米厚。切下的薄片往往皱折,要放到加热的水中烫平,再贴到载玻片上,放45℃恒温箱中烘干。

        步骤五:脱蜡

        常用HE染色,以增加组织细胞结构各部分的色彩差异,利于观察。苏木精(Hematoxylin,H)是一种碱性染料,可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色,被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。伊红(Eosin,E)是一种酸性染料,能将细胞质染成红色或淡红色,被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。染色前,须用二甲苯脱去切片中的石蜡,再经由高浓度到低浓度酒精,最后入蒸馏水,就可染色。

        步骤六:染色

        HE染色过程是:

        ①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

        ②酸水及氨水中分色,各数秒钟。

        ③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

        ④入70%和90%酒精中脱水各10分钟。

        ⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

        步骤七:脱水透明:

        染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。

        步骤八:封固:

        将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。待树胶略干后,贴上标笺,切片标本就可使用。

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