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        植物组织石蜡切片的制作

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        一、实验目的
        1.熟练掌握石蜡切片的方法。
        2.掌握永久制片的制作过程,为研究植物的内部结构奠定基础。
        3.学会植物内部结构的比较研究方法。
        二、实验器具与 试剂
        1.器具
        石蜡切片机、烘箱、显微镜、染色缸、小培养皿、镊子、毛笔、吸水纸、纱布、载玻片、盖玻片等。
        2. 试剂
        10%番红水溶液、0.5%固绿(用95%的酒精配制)、酒精(100%、95%、80%、70%、50%)、二甲苯、 蒸馏 水、甘油、中性树胶等。
        三、实验材料
        幼嫩植物各部分,根据季节选择材料。
        四、实验内容与方法
        石蜡切片法是显微技术上最重要、最常用的一种方法。它是把材料封埋在石蜡里面,用旋转切片机切片,可以切出很薄的切片。凡是精细的工结构,大都用石蜡切片。全都过程如下:
        1.固定 2.洗涤 3.脱水与硬化 4.脱酒精 2.封埋 6.切片
        7.粘片 8.脱蜡 9.染色 10.脱水 11. 透明 12.胶封
        (一)固定
        1.固定的意义:固定就是用药品把细胞杀死,使细胞的原生质凝固,死后不发生变化,尽可能保持原来的结构以供我们观察。良好的固定剂,应是穿透力强,使细胞立刻致死,原生质全部凝固;不发生任何变形,增强折光率,并且不妨碍染色。
        2.固定液的种类:固定液的种类很多,根据配制成分可划分为:
        (1) 简单固定液:以一种化学药品配制的固定液。常用的简单固定液有:
        A.酒精即乙醇,用作固定液,常用纯酒精或95%酒精。酒精穿透力强,固定时间常在1小时以内。高浓度酒精有使材料收缩的作用。70%的酒精可作保存液。配制低度酒精必需要用普通酒精即95%的酒精,绝不可用纯酒精。酒精为还原剂,不能与铬酸、锇酸、重铬酸钾等氧化剂配合。酒精可使核酸,蛋白质及肝醣等发生沉淀,但能溶解脂肪及拟脂。
        B.福尔马林即甲醛,具强烈刺激性的气味,纯净的甲醛,为无色透明液体。固定用的浓度为4-10%甲醛也是强还原剂。不能与铬酸、锇酸等氧化剂配合。经固定后,材料变硬,通常不引起皱缩,但随后经过他种药剂处理时,就每每出现皱缩。所以甲醛一般不单独作固定,而与其他液体混合使用。
        C.醋酸:为无色透明的液体,刺激性极强,冷则凝结成冰,故又叫冰醋酸。醋酸以与水和酒精配成各种比例的溶液,所用浓度为0.2~5%,也常与其他固定剂配合使用。醋酸穿透性很强,单独使用,有使原生质膨胀的作用,故常与酒精,甲醛等合用,醋酸为固定染色体的优良固定液,因此固定染色体的固定液中,几乎都含有醋酸。
        (2) 混合固定液:由几种药剂,适量配制而成。常用的有下列几种:
        A、F.A.A固定液(又称万能固定液):
        [用途]这个固定液在植物研究上,应用最多,为植物组织最常用的固定液。固定时间,不受限制,短为24小时,长可延至数月或数年。野外工作,非常便利。并且固定的材料,不妨碍染色,但对染色体的固定不佳。材料固定后,用50%酒精洗涤数次。

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