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        石蜡切片的制作及HE染色

        相关方法:石蜡切片制作(苏木精-伊红对染法)

        互联网

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        实验原理
        1、利用光学显微镜对生物样品进行观察,需要样品必需要一定的厚度范围内,才能保证光线的透过性。
        2、由于生物样品多为软性材料,所以必需将其包埋在一定的固体支持物中,常用的支持物有石蜡、火棉胶等。其中石蜡切片是最常用的光镜样品制片技术。
        3、苏木素(Hematoxylin)与伊红(Eosin)对比染色法(简称H.E.对染法)是组织切片最常用的方法。这种方法染色广泛,对组织细胞的各种成份都可着色,便于全面观察组织构造,而且适用于各种固定液固定的材料,染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色细胞核被苏木素染成蓝紫色,细胞质被伊红染色呈粉红色。
        实验用品 
        1、实验器材:恒温箱、切片机、解剖器械、载玻片、酒精灯、染色缸和烧杯等。
        2、实验 试剂 :
        Carnoy固定液;二甲苯;各级浓度的酒精溶液;Ehrlich苏木精染液;伊红染液
        3、实验材料:小鼠小肠或肝组织
        方法与步骤
        石蜡切片样本的制作
         
        实验步骤
         
        注意事项
         
         
        1、断头处死小鼠,剖开腹腔,取出一部分肝组织,生理盐水冲洗,并将其修切成小块,加入固定液进行固定,各级酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。
         
         
         
        2、材料上切片机切片,用 蒸馏 水将切片贴于干净无油的玻片上,在酒精灯上略烤,使切片展平,将贴好的片子于室温老化3—7天后,即可用于染色。
         
         
        石蜡切片的HE染色
         
        实验步骤
         
        注意事项
         
         
        3、切片脱蜡至水用于染色:切片入二级二甲苯各15min,再入100%乙醇(二级)→95%乙醇→75%乙醇→50%乙醇→ 蒸馏 水中各3~5 min。
         
         
         
        4、染色
         
        (1)切片入苏木色精中染色约10~30 min,
        用自来水流水冲洗约15 min。冲洗过程中使切片颜色发蓝。
         
        (2)分化:就是将细胞质着的色褪去,使细胞核着色更加鲜明,也称分色。将切片放入1%盐酸酒精液(盐酸1份+70%乙醇100份)中褪色,见切片变红,颜色较浅时即可,约数秒至数十秒钟。
         
        (3)复染:用0.5%伊红酒精液(伊红0.5 g + 95%乙醇100 ml)对比染色2~5 min。
         
         
         
        1、染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低,适当缩短或延长。室温高时促进染色,染色时间可短些,否则可适当延长时间,冬季室温低时可放入 恒温箱 中染色。
        2、蓝化时入碱性水也可,但用促蓝剂对伊红可能拒染,如果时间来得及,应以流水冲洗使切片显示蓝色为宜,但要注意流水不能过大,以防切片脱落,并随时用显微镜检查见颜色变蓝为止。
        3、分化是H.E.染色成败的关键,如分化不当会导致染色不匀、或深或浅,得到的切片染色效果差。如果染色适中,可取消此步骤。
        4、 伊红主要染细胞质,着色浓淡应与苏木色精染细胞核的浓淡相配合,如果细胞核染色较浓,细胞质也应浓染,以获得鲜明的对比。反之,如果细胞核染色较浅,细胞质也应淡染。可在伊红酒精液中滴加数滴冰醋酸助染,促使细胞质容易着色,并且经乙醇脱水时不易褪色。

         

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