传统 ES 打靶 VS TurboKnockout® 基因敲除

上个世纪 80 年代，随着基因重组技术的不断完善和小鼠胚胎干细胞（ES）体外培养技术的成熟，基于同源重组的 ES 打靶得以建立。ES 打靶基因敲除技术修饰准确、效果稳定、成功率极高，一直被认为是对模式动物进行特定基因修饰的金标准。但由于嵌合体阳性率低，且必须与工具鼠交配才能获得删除 Neo 的杂合子，使得构建周期长达 12-16 个月。

20 世纪初，核酸酶基因编辑技术（TALEN、CRISPR/Cas9）出现，其周期短（6~8 个月）、无物种限制等优势迅速受到广大科研学者的青睐。但由于脱靶效应至今无法避免，也无法胜任复杂的基因敲除，因此传统 ES 打靶技术仍是首选。

那么，如何在保持传统 ES 打靶优势的基础上优化其构建流程呢？赛业 TurboKnockout®基因敲除技术应运而生。TurboKnockout®基因敲除通过跨越 ES 打靶「嵌合体阳性率低」阶段并真正实现自删除 Neo，从而减少两代繁育时间，使 ES 打靶缩短至 6~8 个月。在核酸酶技术尚未成熟之前，TurboKnockout®将是研究者的最佳选择。

技术对比：

技术原理：

1、跨越「嵌合体」阶段：

基于 ES 打靶的 TurboKnockout®采用了独特建系的具有高效遗传优势的 ES 细胞系（实验数据表明，在获得 100% 雄性嵌合体小鼠方面，TurboKnockout® ES 细胞系是对照传统 ES 细胞系的三倍以上），通过特定胚胎发育阶段的显微注射，使 TurboKnockout® ES 细胞 100% 代替内源 ES 细胞，从而实现跨越「嵌合体」阶段。

2、实现自删除 Neo：

TurboKnockout®采用独特的 Self-deleting Neo Cassette 所获得的嵌合体，在与任何品系的小鼠交配均可百分百自删除 Neo。也就是说，TurboKnockout®不仅仅实现跨越「嵌合体」阶段，还能真正自删除 Neo 从而快速获得去 Neo 的杂合子小鼠。

技术优势：

● 基因修饰准确、效果稳定；

● 没有脱靶效应，可胜任复杂的基因敲除；

● 自删除 Neo 可进一步缩短服务周期，简化了小鼠交配流程。

服务流程对比：


因此，与传统 ES 打靶相比，赛业生物革命性的 TurboKnockout®基因敲除能直接减少两代繁育时间，缩短 ES 打靶至 6~8 个月。在核酸酶技术（TALEN/CRISPR）尚未成熟之前，TurboKnockout®将是研究者的最佳选择。