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        用SGM Plus®进行扩增

        相关实验:细胞系的 DNA STR 谱

        最新修订时间:

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒
        仪器、耗材

        步骤

        1. 参照 ABI 的操作步骤,为待扩增样品准备足量的混合物,每个样品管包含:

        (a) AMPF/STR®PCR 反应混合物 21 μl

        (b) AMPF/STR®SGM Plus®引物一套 11 μl

        (c) Amplitaq gold®DNA 聚合酶 1μl

        2. 从每个样品管吸出 30 μl 混合物,或加到单个大 PCR 管中,或加到薄壁微滴定板中,用黏性薄片封板。

        3. 从冰箱取出样品,待融化。

        4. 混匀样品,甩下管中内容物。

        5. 加约 1 ng DNA 到已有适量 SGM Plus® PCR 混合物样品管中,加适当体积的无菌纯水(如 Sigma 组织培养用水)至终体积 20 μl。

        6. 同时扩增一个已知基因,作为对照(如作为试剂盒的对照)。

        7. 将样品管置热循环仪(如 ABI9700)上,已设定了适当的循环细节的程序,如下,开始运行:

        (a)95°C 保持 11 min ± 5s。

        (b)94 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

        (c)59 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

        (d)72 ± 1°C 保持 1 min ± 2s。

        8. 重复步骤 7b 到 7d28 次。

        9. 60 ± 1°C 保持 45 min ± 5s。

        10. 4°C 保温至需要时。

        来源:丁香实验

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