免疫细胞功能检测

超敏反应的概念、参与物质、致病机制、常见疾病、防治方法等。

免疫缺陷是一种由于人体的免疫系统发育缺陷或免疫反应障碍致使人体抗感染能力低下，临床表现为反复感染或严重感染性疾病。

免疫学和遗传学交叉的边缘学科，主要研究免疫系统的结构和功能如免疫应答、抗体的多样性等的遗传基础。

正常细胞的磷酯酰丝氨（phosphatidylserinePS）位于细胞膜内表面，细胞凋亡时翻转露于膜外侧，可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件，先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。将效应细胞与靶细胞充分共育后，用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体（如CD8-PE）标记效应细胞（不能与PE-mABA结合的细胞即为靶细胞），再用FITC-anne ...

MTT和CCK-8（上海同仁）的原理基本是一致的，但也存在如下的区别：（1）：常规操作的MTT法受药物本身的颜色、培养基的颜色、血清的浓度 使结果的变异较大。如采用潘兴瑜的MTT改进法将有效的降低试验的飘变率，本人硕士期间就采用潘的MTT改进法，试验重复一两次就的到理想的结果！受益非浅！（2）：CCK-8是最近新出现的方法，它操作简便、结果变异率小。对悬浮细胞的测定有它独到的地方！CCK-8为黄色 ...

MTT实验是检测细胞活力的实验方法，由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此也常常用来检测细胞的增殖情况。MTT的原理：活细胞有琥珀酸脱氢酶，将MTT还原成棕褐色沉淀。由于一般介绍园子里已经很多，笔者将自己的心得按照实验流程与大家交流交流。1、培养好细胞点板。养细胞没啥好说的，如果不知道细胞如何养，那就看看相关的文献方法。如果知道了细胞的名字，就可以上www.atcc.org检索细胞的培养信息，这个网站 ...

LDH释放法测定CTL的特异杀伤率1.2.3.1　效应细胞的制备　激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。1.2.3.2　靶细胞的制备　P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105.ml-1或3.33×105.ml-1( ...

原理：用 Na 2 51 CrO 4 标记靶细胞，若待检效应细胞能杀伤靶细胞，则 51 Cr( 铬 ) 从靶细胞内释出。以γ计数仪测定释出的 51 Cr 放射活性，靶细胞溶解破坏越多， 51 Cr 释放就越多，上清液的放射活性也就越高，应用公式可计算出待检效应细胞的杀伤活性。 步骤（以CTL杀伤肿瘤细胞为例）： (1)效应细胞: 将分离的外周血T细胞 培养7 d后按照DC:T = 1 ...

细胞介导的免疫反应（cell mediated immune CMI）在机体抗感染及抗肿瘤免疫、移植排斥反应和自身免疫病中发挥重要的作用。CMI的主要效应细胞之一为细胞毒T淋细胞（cytotoxic T lymphocyteCTL）。目前在医学基础与临床研究中重视CTL活性测定，将其作为了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的重要方法之一。 经文学事业上的资助者的CTL活性测 ...

绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠DTH（足跖增厚法）1 原理 SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4天后，当再以SRBC攻击时，即可见攻击部位出现迟发型变态反应。 2 材料 游标卡尺（精密度0.02mm）、SRBC、微量注射器（50μL）。3 实验步骤3.1 致敏 小鼠用2％(v/v)SRB ...

5-brdu 的分子量为307.1，将100mg分为三份30.7mg(0.1mmol），溶于1ml三蒸水，分装-20度保存。用的时候再稀释100倍，如在1ml溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量，如100ul避免反复冻融使其活性降低。 BudR贮存液的配制：BudR 5mg（先用0.5ml 1N NaOH溶解）然后加蒸馏水至 5ml，即成1000ug/ml的贮存液，因BudR遇光会发生分解，贮 ...

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。 2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。 3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。 4．甲醇/醋酸固定10min。 5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧 ...

原理：荧光染料CFSE 也可称为 CFDA SE(56- carboxyfluorescein diacetatesuccinimidyl ester) 即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂 是一种可穿透细胞膜的荧光染料具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团这使得CFSE 成为一种良好的细胞标记物。当CFSE以含有两个乙酸基团和一个succinimidyl ...

原理：T细胞、B细胞表面具有识别抗原的受体和有丝分裂原受体，在特异性抗原刺激下可使相应淋巴细胞克隆发生增殖。植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA），抗CD２、抗CD３ McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖；而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体（SAC）、脂多糖（LPS，对小鼠有作用）则刺激B细胞发生增殖；美洲商陆（PWM）、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现， ...

一）材料及试剂 1．培养基 ;RPMI-1640或TC199培养液 2．PHA;同形态学方法 3．小牛血清 4．3H-TdR;选用比活性为2Mci~10Mci/mg分子的制品，将1Mci/ml溶液以生理盐水稀释成100uci/ml，于4℃保存备用。临用时再用培养液稀释成10uci/ml溶液。 5．3%冰醋酸 6．浓 ...

3H MTT检测法主要反映细胞的能量代谢，是检测细胞增殖活力的一种简便准确的方法，其原理是在活细胞生长和增殖过程中，线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解成兰紫色的甲(Formazan)生成的甲量的多少与细胞的数量和细胞的活力成正比 羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)是一种可穿透细胞膜的荧光染料，具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羟基荧光素二醋酸盐基团，使C E成为 ...

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(45)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-35-di- phenytetrazoliumromide MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（ ...

做免疫学特别是肿瘤学实验，总免不了要测淋巴细胞或其他细胞对肿瘤细胞的杀伤，老外最常用的是Cr51放射实验，但这个方法在国内的不少地方都不能做，而MTT这个方法又太老了，而且也不准确，那么替代方法就用流式细胞术，又方便，又准确，这也是偶参照老外的方法吧。1　计数靶细胞，并加入CFSE，使CFSE终浓度达到2uM37度30分钟。2　拿出后，1000rpm5min可隐约看到细胞染成黄色，PBS洗三次3　 ...

乳酸脱氢酶（LDH）测定法1 原理 活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被还原成紫红色甲月赞 类化合物。在酶标仪上用490nm比色测定。2 ...

同位素3H-TdR测定法1 原理 将用同位素3H-TdR标记的靶细胞与淋巴细胞共同培养时，靶细胞可被NK细胞杀伤。同位素便从被杀伤的靶细胞中释放出来，其释放的量与NK细胞活性成正比。通过测定靶细胞3H-TdR的释放率即可反应NK细胞的活性。2 仪器和材料 液体闪烁仪、多头细胞取集器、二氧化碳培养箱、3H-TdR、RPMI164 ...