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        靶细胞杀伤实验:AnnexiV标记法

        互联网

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        正常细胞的磷酯酰丝氨(phosphatidylserine,PS)位于细胞膜内表面,细胞凋亡时翻转露于膜外侧,可与annexinV高亲合力结合。研究发现PS外翻为细胞凋亡的早期事件,先于膜通透性增加所51Cr或其他染料的释放。

        将效应细胞与靶细胞充分共育后,用PE结合的效应细胞特异性单克隆抗体(如CD8-PE)标记效应细胞(不能与PE-mABA结合的细胞即为靶细胞),再用FITC-annexin V标记凋亡靶细胞,用流式细胞仪区分并定量此三类不同的细胞群,即可计算出效应细胞杀伤靶细胞百分数。

        AnnexiV标记法的优点

        1、简单快捷,无需预标记,直接将上二试剂加入测定管即可;

        2、与51Cr法相关性好(r=0.989),在早期时段更为灵敏,还可在进行分析,尤其适用于动力学分析;

        3、可允许E与T长时间共育,对探讨E通过合成及分泌某些细胞因子(如TNF)而杀伤靶细胞的机理性研究特别有利;

        4、可用荧光显微镜观察测定。

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