靶细胞杀伤实验：LDH法
互联网
20877
一、效应细胞的制备
激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。
二、靶细胞的制备
P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2 mAb时的靶细胞浓度），台盼蓝染色成活率>95%。
三、LDH释放法测定CTL的功能
按表1加样于96孔培养板中，设3个复孔。混匀置二氧化碳培养箱中孵育4h。室温离心，用微量加样器每孔取上清液100μl，送全自动生化分析仪测定每孔的LDH含量。
表1 LDH释放法测定CTL活性的加样情况（μl）
| 分组 | 效应细胞 | 靶细胞 | α-Lyt2 mAb | 1% Triton X-100 | 完全培养基 |
| 自然释放孔 | 100 | 100 | |||
| 最大释放孔 | 100 | 100 | |||
| 实验孔1 | 100 | 100 | |||
| 实验孔2 | 100 | 60① | 40 |
注：靶细胞浓度为3.33×105/ml 四、计算CTL活性 特异杀伤率(%)=(实验孔LDH值-自然释放孔LDH值)/(最大释放孔LDH值-自然释放LDH值) 五、统计学处理 DTH的测定，4组间比较采用方差分析，两组比较采用q检验。对于CTL的特异杀伤率，先进行百分数的平方根反正弦转换后采用方差分析进行4组间比较，两两比较采用q检验。 |
