迟发型变态反应（DTH）检测：足跖增厚法

绵羊红细胞（SRBC）诱导小鼠DTH（足跖增厚法）

一、原理

SRBC可刺激T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，4天后，当再以SRBC攻击时，即可见攻击部位出现迟发型变态反应。

二、材料

游标卡尺（精密度0.02mm）、SRBC、微量注射器（50μL）。

三、实验步骤

（1）致敏

小鼠用2%(v/v)SRBC腹腔或静脉免疫，每只鼠注射0.2mL（约1×108个SRBC）。

（2）DTH的产生与测定

免疫后4天，测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射20%(v/v)SRBC，每只鼠20μL（约1×108个SRBC），注射后于24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。

四、数据处理和结果判定

一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值< F0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值≥F0.05,P≤0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。

以攻击前后足跖厚度的差值来表示DTH 的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。

五、注意事项

测量足跖厚度时，最好由专人来进行。卡尺紧贴足跖部，但不要加压，否则会影响测量结果。

攻击时所用的SRBC要新鲜（保存期不超过1周）。