传代培养

1、CHO细胞 CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary)，该细胞具有不死性，可以传代百代以上，是目前生物工程上广泛使用的细胞。全世界批准正式应用于人类疾病治疗或疾病预防的基因工程产品约有三十多种，其中只有一种(乙肝疫苗)是由酵母菌生产的，其余所有产品都是由CHO细胞和大肠杆菌生产的，大肠杆菌不能形成有活性的二聚体(如白介素2)，也不具有糖基化的功能(如EPO)， ...

293细胞培养技术，供大家参考。 1、293细胞明显适应酸性环境pH值在6.9～7.1时可顺利贴壁生长 换液时动作要轻。一般用高糖的DMEM培养基。 2、传代：倒去废液，PBS洗一次（轻），用0.02%EDTA与0.25%Trypsin消化，生长良好细胞，培养瓶中轻摇使之流遍所有细胞表面即将其吸除或弃去消化30s，然后吸去，再让剩下的EDTA/Trypsin作用30s镜下观察细胞变圆就可加DMEM ...

我做的是胃癌三种细胞株MGC-803BGC-823以及SGC-7901的培养，具体方法步骤如下 1）细胞传代： A将复苏长满细胞的培养瓶中培养基吸出加3ml 0.86%生理盐水洗涤两次弃去洗涤液加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml消化液均匀覆盖细胞表面消化时间约1-3分钟。 B消化后在倒置显微镜下可见细胞皱缩变圆边缘折光性增强在细胞尚未脱落时倒掉消化液立即加入血清或含血清的培养基终止消化。 C 用 ...

1、传代前24h先将组织块去除：等到细胞覆盖瓶底80％以上后进行组织块去除操作。可用弯头玻璃吸管将组织块轻轻挑起吸出，确保无组织块留下，以防坏死污染。 2、胰酶消化：倒掉旧培养液，用D－HANKs液清洗两边，加入已预热（37度）10min的0.25％胰酶消化液2ml，2－3min后镜下观察，发现胞质收缩，细胞间隙增大，立即用含胎牛血清的培养液终止消化。 3、弯头吸管吹打细胞：吹打一定时间后到镜下观 ...

原代培养 1.取新生3d以内BALB/c小鼠，断颈处死后立即投入75%酒精中消毒5min（虽有头部皮肤保护，但时间不要过长，所以事先要把准备工作做好之后再去杀老鼠）。 2.D-Hank’s液漂洗后分离颅盖骨，刮除骨膜和结缔组织，DMEM清洗颅骨骨片并剪碎。（自我感觉碎一点好一些） 3.加入0.25%胰蛋白酶（含0.02EDTA），37°恒温消化20min，吸出消化液，之后1mg ...

我养的是RAW264.7细胞株，前面有战友都提到过这种细胞的消化传代，但是因为这种细胞最大的特点是贴壁特别强， 每次传代都很难消化下来， 刚开始使用胰酶消化，发现37度， 消化15min细胞也还是吹不起来，后来又用单纯的用细胞刮刀刮的办法，但是这样养了一段时间，发现细胞损伤非常大，贴壁性变差，生长缓慢，后来使用了现在这个方法，到现在细胞的生长状况一直很好! 简述如下： 1) 将培养瓶内旧的培养液弃 ...

我也在养A549细胞，也来讲讲自己的经验，希望大家共同学习。 我们主要是看细胞的密度，大概有80-90%铺满培养瓶底就可以传代了，时间长短不一，大概有5-7天吧，一瓶一般传3-4瓶，中间一般会有一次换液的。 培养基用的是1640+10%的小牛血清+200u/ml庆大霉素。传代时先倒掉就培养基，然后用PBS洗一两次，然后再用0.25%胰酶消化（100ml培养瓶盖住表面大概要两滴管左右），可镜经下观察 ...

弃血清---PBS洗一或两遍---加1-2ml的消化液（0.1%的胰酶+0.02%的EDTA）消化45秒作用（不用放回培养箱，细胞面紧贴自己的手掌心，平放）---弃去胰酶后让残留的胰酶再作用1分钟----立即加含血清培养基终止胰酶的作用---轻轻吹打细胞很容易就脱离瓶壁。注意，吹打次数不要太多，机械损伤对细胞的损害非常大，吹打过程中也不要有太多气泡，以免气泡的剪切力损害细胞。 一般而言，细胞消化传 ...

吸出培养瓶中的培养基用Tr-EDTA洗1次； 加入刚解冻的Tr-EDTA少量，轻轻摇晃，让所有细胞与其充分接触。置于37度培养箱作用2-3min 在镜下看到细胞圆缩，右手拿细胞瓶呈水平方向与左手掌托（肉较多处）轻轻磕n次，可以看到细胞哗哗往下掉，立即加培养基终止消化。 用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：3分瓶。 ...

我养了三种贴壁的细胞，用同样的消化方法，都很好。这三种细胞是A549，ECV304，2BS。 1、0.25%胰酶新鲜解冻不需要预热。 2、倒掉培养瓶中的培养基并用预冷的D-Hank‘s洗两次（要冷，用前4度中取出）。 3、加入约1-2ml的胰酶晃动瓶子使液体浸润瓶底。 4、超净台上放置约1-2分钟（2BS需要的时间更短，约1分钟） 5、镜下观察（我一般都省略了，因为每次的效果都很好）见 ...

1、 0.25%胰酶先解冻，并置入孵箱中预热20分钟。 2、 倒掉培养瓶中的培养基，并用PBS洗两次。 3、 加入月1.5ml的胰酶，并晃动瓶子，使液体浸润瓶底。 4、 将瓶置入孵箱约2分钟 5、 镜下观察，见细胞边缘折光增加，即可加入含血清的培养基终止消化。 6、 吹打20次左右，细胞就能脱壁了。 7、 稀释，分瓶接种 ...

细胞：猪肾细胞系(IBRS-2) 猪 国内 来源： 猪 生长类型：贴壁生长 传代步骤： 弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞３次并到尽所有液体-->加入１ml无钙镁水，用巴氏吸管滴１－２滴２.５％的胰酶-->放入37度二氧化碳温箱中消化１－２-->弃去胰酶，加入２０ml含１０％小牛血清的ＭＥＭ生长液，拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分2瓶--& ...

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。 大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。 我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已 ...

此种细胞的培基最好用是DMEM！以前我们用1640，但生长及其缓慢。 正常情况下，2天换一次液4-6天传代一次. 传代过程： 1、直接倒掉DMEM培基 2、pbs将细胞洗2次 3、倒掉pbs 4、加入0.25％胰酶（0.02%EDTA）1－2ml/培养瓶 5、水平放置培养瓶，消化3－5分钟 6、显微镜下观察：细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少数细胞漂浮起来就可终止消化。 7、加入完全培基 ...

特性：悬浮细胞 培养条件：37度 5% CO2培养（方瓶站立培养） 营养需求：1640+15%FCS+10%TPB+100U双抗+100U两性霉素，状态不佳时适当地加2%鸡血清或2%马血清 生长特性：细胞对密度没有高的要求，生长较快；但对pH值要求高，需要在6.8-7.2，不能过高。 传代：对于隔夜的细胞只需要将细胞分为两/三孔/瓶即可，对于细胞液过酸时，则将细胞悬浮，1000rpm离心后，弃取上 ...

培养条件：RPMI-1640培养液，10%（胎牛或小牛）血清，5%CO2，37度饱和湿度孵箱培养。 细胞生长状态：上皮样贴壁生长。 传代： 细胞长满95%->弃培养液->0.25%胰酶消化2min->弃掉胰酶->加入培养液吹打贴壁细胞，将细胞悬液分瓶传代。若一传二，则3天长满；若一传三，则需要4-5天长满。 ...

我和师兄是从04年初就开始用LLC-PK1细胞系筛选多种类型的、数量极多的各种可能有用的新药，摸索发现消化液的配方为0.25％的胰酶+0.02%EDTA 就行了，要配在PBS中，如果能加Hepes那就更保险了（有一次实验室Hepes用光了，配液时没加Hepes，照样没问题） 消化步骤：吸走培液后最好用PBS过一遍－>50ML培养瓶加2ML在37ºC预热消化液－>37º ...

吸出培养瓶中的培养基，用PBS液洗涤1-2次； 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可）； 在镜下看到细胞退缩变园，立即给予少量培养基终止消化，我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化； 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：2或1：3分瓶即可。 ...

细胞复苏后，在显微镜下观察大约有80%~100%的细胞已经贴壁时用新鲜的培养基换掉原来的培养基，去除DMSO对细胞的毒害，估计复苏到换液的时间为0.5~1.5h。 2~3d细胞长满后传代，传代前先把培养基和0。2%的胰酶从冷库放到室温1~2H，由于冷库中的培养基温度与在温房的温差很大，这样做可以防止细胞"感冒"，然后把培养瓶中的废液倒掉，加入约5~10ml胰酶，把培养瓶平放使胰 ...

大鼠骨髓经ficoll分层后培养。一周换液2次。三周后，可以传代了。然后大约7天可以传代一次。跟das1977网友的方法稍微有点不同。 1. 弃去旧培养液。 2.预热的PBS液轻缓漂洗细胞两遍，尽量洗去残余血清，弃去PBS 3 加0.25%胰酶0.05%EDTA于37度条件下消化，约两到三分钟，倒置相差显微镜下观察，细胞缩成圆形漂浮为准。我还用手轻轻击打培养皿的两侧，希望可以加速其消化。实验室里的 ...