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        LLC-PK1(猪的近端肾小管细胞系)消化和传代

        互联网

        6890

        我和师兄是从04年初就开始用LLC-PK1细胞系筛选多种类型的、数量极多的各种可能有用的新药,摸索发现消化液的配方为0.25%的胰酶+0.02%EDTA 就行了,要配在PBS中,如果能加Hepes那就更保险了(有一次实验室Hepes用光了,配液时没加Hepes,照样没问题)

        消化步骤:吸走培液后最好用PBS过一遍->50ML培养瓶加2ML在37ºC预热消化液->37ºC温箱放置1Min->显微镜下观察,细胞松散开,但尚未脱落时,及时吸走消化液->必要时可在吸走消化液的情况下,继续放置一会儿,待到细胞完全松散开,加培养基,吹打。这时候应该就是单细胞悬液了。

        如果不是单细胞悬液,怎么办?

        实验常需要我们的细胞是单细胞悬液的,要不然组间差异太大,无法说明问题。我们当时刚接手种子库的时候,复苏出来的多管LLC-PK1细胞成团特别严重!怎么吹打都无法得到单细胞悬液!(回想起来,可能是当初实验室的前几辈师兄师姐消化的时候没有搞好,或者没有吹打并且冻存了不合格的细胞所致)。后来我们到科室拿了几只5ML注射器,装上针头,来回吹打了5-6次,得到单细胞悬液了!细胞损伤小,下游的实验进展很顺。而且经过我们俩在这之后的正规操作,两个星期之后,再也不用针管抽吸,细胞消化下来就已经是单细胞了!

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