抗原设计

微量细胞毒试验检测各类免疫细胞的数量【基本原理】 在补体存在的情况下，针对淋巴细胞CD分子的McAb与相应的CD分子结合，可将细胞杀死，其细胞膜失去屏障作用而使伊红染料透入细胞内，使之染呈红色。而无相应CD分子的细胞则不受损伤，因而不着色。计数死亡细胞数，即可判断待检细胞是否具有相应的CD分子，从而确定T细胞的亚群。该方法简便易行，准确性较高。【试剂及材料】（1） 新鲜兔补体（ ...

红细胞花环法检测各类免疫细胞的数量【基本原理】 采用戊二醛交联技术将McAb或兔抗鼠IgG与羊红细胞（SRBC）结合，制成致敏的SRBC。抗体致敏的SRBC可与T淋巴细胞直接或间接结合，在T淋巴细胞周围形成花环。通过计数花环形成率，从而确定T淋巴细胞各亚群。该方法可分为直接红细胞花环法和间接红细胞花环法。现以间接花环法为例。【试剂及材料】（1） 醛化二抗致敏的SRBC（2） ...

MTT比色法【基本原理】 MTT法是Mosmann 1983年报道的，以后此方法得到了迅速发展并广泛应用于临床与科研研究。其原理是活细胞内线粒体脱氢酶能将四氮唑化合物（MTT）由黄色还原为蓝黑色的甲肷，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。后者溶于有机溶剂（如二甲亚枫或酸化异丙醇等），并可在560nm波长下进行检测。【试剂及材料】（1） MTT：用PBS配成5mg/ml的 ...

3H-TdR掺入试验【基本原理】淋巴细胞受特异性抗原或有丝分裂原刺激后，在转化为淋巴母细胞的过程中，DNA的合成明显增加。且其转化程度与DNA的合成呈正相关，此时若将合成DNA的前体物质胸腺嘧啶核苷用放射性同位素（3H -TdR）标记，加入到培养体系中，即被转化的淋巴细胞摄取而掺入DNA分子内。培养终止后，测定淋巴细胞内掺入的3H -TdR的放射量，就能判断淋巴细胞的转化程度。此方法较客观、精确 ...

MHC/多肽四聚体法检测抗原特异性T细胞数量T细胞通过其表面TCR特异性识别抗原呈递细胞表面的MHC/抗原肽复合物后，被活化和发生增殖，进而分化成效应细胞。因此，可以用MHC/抗原肽复合物检测T细胞表面的特异性TCR，来反映抗原特异性T细胞数量的变化。 Altman等首次发明MHC/多肽四聚体方法并应用于检测可识别HIV抗原肽的特异性CTLs，获得成功。后经Walter等改进，成为检测和 ...

XTT比色法【基本原理】 XTT比色法有Scudiero等首次采用，用于检测细胞增殖。XTT是异种与MTT类似的四唑氮衍生物，可被活细胞线粒体脱氢酶还原成水溶性的棕色甲肷产物，当XTT与电子偶合剂共同使用时，甲肷的生成量与细胞的增殖程度呈正相关。【试剂及材料】（1） XTT：用60℃预热培养液配制成6.6mmol/L，过滤除菌，现配现用。（2） 吩嗪二甲酯 ...

单向混合淋巴细胞培养【试剂及材料】（1） 供者和受者淋巴细胞悬液：浓度调至1×106/ml。（2） 丝裂霉素C：用培养液或PBS配制300μg/ml。（3） 含20％NCS的RPMI-1640完全培养液（4） 3H-TdR【操作方法】（1）刺激细胞的制备:取淋巴细胞1×106，加入最终浓度为30μg/ml的丝裂霉素C，于37℃水浴 ...

抗CD3 McAb诱导的细胞毒性T细胞功能的检测【试剂及材料】 （1） 靶细胞：EB病毒转化的B淋巴母细胞。（2） 含5％NCS的RPMI-1640完全培养液（3） 100μCi/ml 51Cr（4） 抗CD3 McAb（4μg/ml）（5） 2％Triton X-100。【操作方法】（1） 靶细胞 ...

佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法【基本原理】 用佛波酯（phorbol esters）和钙离子载体处理CTL，通过一种TCR复合物非依赖性机制，刺激CTL细胞颗粒酶的胞泌作用。【试剂及材料】（1） 1mg/ml十四酰佛波乙酸酯（phorbol myristate acetate，PMA）二甲亚砜溶液。（2） 1m ...

BA-Spot-ELISA法检测抗体形成细胞【试剂及配制】（1） 包被液（pH 9.6 碳酸盐缓冲液）Na2CO3 0.16gNaHCO3 0.29g蒸馏水加至 100ml（2） 洗涤液（pH 7.4 PBS-Tween 20） KH2PO4 0.2g Na2HPO4・12H20

配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)123456819浓缩胶水0.681.42.12.73.44.15.56.830%丙烯酰胺溶液0.170.330.50.670.831.01.31.71.0mol/L Tris-HCl，pH 6.80.130.250.380.50.630.751.01.2510%（w/ ...

常用储存液的配制溶液配制方法注释PBS将8.0g NaCl、0.2gKCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，将pH调整至7.4，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温保存可配成10x储存液TBS将8.0g NaCl、0.2g KCl、3gTris，溶解于800ml蒸馏水中，用1mol/LHCl将pH调整至8.0，补充蒸馏水至1L，分装，高压灭菌，室温 ...

常用发色底物一、产生水溶性产物的发色底物酶底 物简 称启始颜色终颜色吸收峰（nm）辣根过氧化物酶22’-乙基苯噻唑黄酸盐邻苯二胺33¢55¢-四甲基联苯胺ABTSOPDTMB无色无色无色绿色棕色黄色410492450碱性磷酸酶对硝基酚磷酸盐PNPP无色黄色405b-半乳糖苷酶邻硝基苯酚-b-d-吡喃半乳糖苷ONPG无色黄色410二、产生非水溶性产物的发色底物酶底 物简 称启始颜色终 ...

实验用小鼠的品系实验用小鼠的品系品 系缩 写毛 色MHC-II类基因单体型注 释A/JA白色kAKRAK白色kBALB/CC白色d多数患骨髓瘤的亲代为异基因CBACB野鼠色kC3HC3野鼠色kC57BL/6B6黑色b常用做转基因F2的亲代C57BL/10B10黑色b多数H2是同基因DBA/2淡褐色d常用做转基因F2的亲代NZB黑色d适合制作抗自身抗体SJL白色s常用做转基因F2的 ...

配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)5101520253040506%水2.65.37.910.613.215.921.226.530%丙烯酰胺溶液1.02.03.04.05.06.08.010.01.5mol/L Tris-HCl，pH 8.81.32.53.85.06.37.510.012.510%（ ...

细胞爬片、甩片的制备（一）细胞爬片的制备（1）如果使用载玻片或盖玻片，必须在使用之前灭菌。可以一次灭菌并贮存在无菌状态下。如果使用少量的盖玻片，用金属镊子夹住盖玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干。要轻轻地镊取，以防破裂。为了方便起见，可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中，使用时放在火焰上处理。如果使用的盖玻片或载玻片数量较多，可以将它们放于专用的金属支架上，然后高压消毒。如果需要的数量更大， ...

LAK细胞和TIL活性的测定 LAK细胞和TIL活性的测定基本同NK活性测定方法。但所用靶细胞为对NK不敏感的肿瘤细胞，如Raji、Daudi或自体肿瘤细胞。常采用同位素法如51Cr释放试验、发光免疫测定法及MTT比色法等。 在此介绍MTT比色法。【试剂及材料】（1） 试剂：①四甲基偶氮盐（MTT）；②酸化异丙醇:含0.04mol/L HCl的异丙醇；③96孔细胞培养板。 ...

凝胶染色（一）标准考马斯亮蓝染色法（1）电泳后，将凝胶转入一洁净的玻璃或塑料容器中。加入５倍于凝胶体积的0.25%考马斯亮蓝R-250(溶解于50%甲醇和10%乙酸中)；（2）室温下振摇温育４ｈ至过夜；（3）去除染色液，收集保存可重复使用20-40次；（4）依次在25%甲醇和7.5%乙酸中室温振摇下脱色。灵敏度为0.1-0.5ug蛋白／每条带。注：使用加热的染色液或脱色液可以缩短染色或脱色时间。 ...

乳酸脱氢酶释放试验测定NK细胞活性【基本原理】 乳酸脱氢酶（LDH）是活细胞胞浆内含酶之一，在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中.释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I（NAD+）变成还原型辅酶I（NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化氮唑蓝（INT）或硝基氯化四氮唑 ...

巨噬细胞吞噬功能测定―皮泡法【试剂及材料】（1） 斑蟊酊剂：取药用斑蟊以95％乙醇制成10％酊剂，室温下浸泡两周后使用。（2） 鸡红细胞（CRBC）悬液：取鸡血1～2ml，阿氏液抗凝（放4℃冰箱可保存2～4周）。试验前用无菌生理盐水洗3次，然后配成5％CRBC悬液。（3） Giemsa染色液【操作方法】（1） 取1cm2大小的滤纸 ...