• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        佛波酯和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法

        互联网

        2166
        佛波酯(phorbol esters)和钙离子载体诱导的CTL颗粒酶释放分析法
         
        【基本原理】
           用佛波酯(phorbol esters)和钙离子载体处理CTL,通过一种TCR复合物非依赖性机制,刺激CTL细胞颗粒酶的胞泌作用。
         
        【试剂及材料】
        (1)         1mg/ml十四酰佛波乙酸酯(phorbol myristate acetate,PMA)二甲亚砜溶液。
        (2)         1mg/ml钙离子载体A23187的二甲亚砜溶液。配制上述两种试剂的时应注意其毒性和致癌性。
         
        【操作方法】
        (1)         用完全RPMI-1640培养液分别稀释上述两种溶液,使PMA为40ng/ml和钙离子载体溶液为为2μg/ml;
        (2)         取无菌96孔细胞培养板,每孔加入2×106 /ml CTL悬液50μl,然后加入25μl 40ng/ml PMA和25μl 2μg/ml 的钙离子载体溶液(两液的最终浓度PMA为 10ng/ml和钙离子载体为0.5μg/ml)并设颗粒酶总释放对照孔(50μl CTL+40μl完全培养液+10μl 1%Triton X-100)和背景孔(50μl CTL+50μl完全培养液),各孔最终体积为100μl;均设三复孔;
        (3)         将培养板置5%CO2 温箱,37℃温育4h;
        (4)         收集培养上清液按TCR单抗诱导法测定和计算酶分泌量。
         
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序