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        单向混合淋巴细胞培养

        互联网

        5012

        [试剂及材料]

        (1)供者和受者淋巴细胞悬液:浓度调至1×106/ml。

        (2)丝裂霉素C:用培养液或PBS配制300μg/ml。

        (3)含20%NCS的RPMI-1640完全培养液

        (4)3H-TdR

        [操作方法]

        (1)刺激细胞的制备:取淋巴细胞1×106,加入最终浓度为30μg/ml的丝裂霉素C,于37℃水浴中作用30min,1000r/min离心10min,弃上清,沉淀细胞用Hanks液洗涤3次;

        (2)反应细胞的制备:将分离的PBMC调整细胞浓度为1×106/ml;

        (3)取刺激细胞和反应细胞各0.2ml,加入1.8ml含20%NCS的RPMI-1640完全培养液中,置37℃培养6d;

        (4)增殖反应的检测:同T、B淋巴细胞增殖反应的检测。

        [结果分析]

        计算SI,同T、B淋巴细胞增殖反应的检测

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