细胞功能测定

SD大鼠颈椎脱臼法处死，75%乙醇浸泡1～2分钟，2次，置超净台内，打开腹腔取出肾脏剪碎，置含Hank’s液的无菌培养皿洗涤，置80目不锈钢筛网上。用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网，滤过组织Hank’s液混合物用吸管吸至120目不锈钢筛网，滤过，去小组织块，滤过物吸至200目不锈钢筛网，轻轻滤过，Hank’s液洗涤1次，收集网上肾小球，镜下观察为分离良好的肾小球。肾小球用0.2%胰酶、0 ...

一、概念 1、细胞系（Cell Line）：原代培养舞经首次传代成功即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系（Lineage of Cells）所组成。 2、细胞株（Cell Strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志必须在整个培养期间始终存在。如果不能继续传代或传代数有限，称为有限细胞株（finit ...

一、准备工作准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器 ...

1．翻倍时间（Doubling Time）细胞的翻倍时间在评价昆虫细胞健康程度的参数中是最容易测量的。翻倍时间应该在细胞处于对数期复制时测量，对于Sf9和Sf21细胞来说通常是介于16-24小时之间，不过大多数在20-22小时。dt=t×ln2/ln(Ct/Co)，其中dt为翻倍时间，Co为起始细胞数目，Ct为经过时间t后的细胞数目，t为Co和Ct两次计数之间的间隔时间，所有的时间都以小时为单位。 ...

组织数量(3-6mm3小块)脉冲时间条件乳腺组织3－62次30秒新鲜或冷冻膀胱4－52次20秒新鲜或冷冻结肠3－62次20秒新鲜或冷冻胃4－62次20秒新鲜或冷冻胃肿瘤边缘组织3－62次20秒新鲜或冷冻健康组织、胃肿瘤3－42次20秒新鲜或冷冻淋巴结3－62次15秒新鲜或冷冻脾脏3－62次15秒新鲜或冷冻肝脏3－62次15秒新鲜或冷冻卵巢3－62次30秒新鲜或冷冻前列腺2－32次35秒新鲜或冷冻 ...

1. 吸除培养瓶内旧培养液。2. 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许，以能覆满瓶底为限。3. 置温箱中2~5分钟，当发现细胞质回缩，细胞间隙增大后，立即终止消化。4. 吸除消化液，向瓶内注入Hanks液数毫升，轻轻转动培养瓶，把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时，动作要轻，以免把已松动的细胞冲掉流失，如用胰蛋白酶液单独消化，吸除胰蛋白酶液后，可 ...

一、原理 细胞周期指细胞一个世代所经历的时间。从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束为一个周期。细胞周期反应了细胞增殖速度。 单个细胞的周期测定可采用缩时摄影的方法，但它不能代表细胞群体的周期，故现多采用其他方法测群体周期。 测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法等，这里介绍一种利用BrdU渗入测定细胞周期的方法。 BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DN ...

基本原理： 在长期的细胞培养过程中可能会出现微生物污染或基因型改变等情况，会导致具有优良特性细胞系的丢失。为防止这些细胞的丢失，细胞可以经快速冷冻并几乎无限期保存在非常低的温度下，如液氮（-176℃）。试剂和设备：冷冻液: 90%灭活血清 10%DMSO（或甘油），用0.45μm微孔滤膜过滤除菌，4℃保存；培养液；台盼蓝溶液（0.4%溶解于PBS）；70%乙醇；组织培养瓶；15-50 ml 无 ...

基本原理通过在支持物（如盖玻片）上培养贴壁细胞，可以应用抗体检测细胞表面抗原的表达或进行酶细胞化学以及免疫细胞化学检测。该方法的优点是细胞贴壁牢固，能够维持细胞生长时的状态。试剂和设备细胞悬浮液；6孔平底组织培养板，或φ60 mm培养皿；18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的盖玻片；含血清培养基（通常为 RMPI 1640含10% 小牛血清，100U/ml青霉素，100 ...

⑴脐带收集：用无菌止血钳夹闭脐带两端，在止血钳外侧剪断脐带，放入盛有4℃Cord Buffer的饭盒内。脐带在4℃放置不应超过24小时。⑵ 脐带内皮细胞分离　　带无菌手套，取出脐带，在止血钳内侧用碘酒和酒精棉球消毒后，用无菌剪刀将两端脐带剪除。　　　　　　　　　　　　　　　　　　↓ 在脐带一端找到静脉，插入脐带静脉插管，用2根粗丝线扎牢，用Cord Buffer抽吸有的30ml注射器冲洗 ...

1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置 ...

1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，再补加10ml培养液，吹打使细胞悬浮。4．低速离心（500～1000转/分）5分钟，取上清后再重复用培养液漂 ...

　　1 PS（磷脂酰丝氨酸）在细胞外膜上的检测 　　PS从细胞膜内侧转移到外侧在细胞受到凋亡诱导后不久发生 可能作为免疫系统的识别标志。AnnexinV，一个钙依赖性的磷脂结合蛋白，能专一性的结合暴露在膜外侧的PS，再通过简单的显色或发光系统进行检测。由于这是一种凋亡早期的活细胞检测（悬浮细胞和贴壁细胞都适用），可与DNA染料或别的晚期检测方法相结合来标记凋亡的发展阶段。 　　美国著名生物试剂公司 ...

　　细胞凋亡晚期中，核酸内切酶（某些Caspase的底物）在核小体之间剪切核DNA，产生大量长度在180-200 bp 的DNA片段。对于这一现象的检测通常有以下几种方法： 　　1 TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling） 　　通过DNA末端转移酶将带标记的 dNTP （多为dUTP）间 ...

1．在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104～10×4 WEHI-164细胞的培养液（含10％小牛血清的RPMI-1640培养液），37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养2～3小时，让细胞帖壁。2．用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品，根据需要3～5倍递次稀释待检样品，每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品，每个稀释度3个重复孔。对照孔6个，3个阳性对照孔各加0.1ml ...

1．按MTT检测法培养细胞和用不同稀释度的细胞因子处理细胞。2．吸去培养液，用PBS洗涤两次（如为悬浮细胞，应在吸去上清液前先离心）。3．每孔加60μl NAG染液，在37℃ 5％ CO2的饱和水汽二氧化碳培养箱中培养4小时。4．每孔加90μl终止液，混匀后置酶联检测仪上测定光密度（OD）值，检测波长402nm。以OD值对样品稀释度作图，比较标准曲线和待测样品曲线即可求得待测样品中细胞因子的含量。 ...

一、DNA聚合酶或Klenow大片段介导的原位缺口平移（ISNT）1．切片常规脱蜡，梯度乙醇复水化。2．将切片组织浸入2×SSC液中，80℃，20min，然后蒸馏水冲尽。3．0.5％胃蛋白酶（pH2.0）37℃消化0～20min，PBS洗尽。4．用滤纸擦干组织块周边液体放入湿盒组织切片上滴加缓冲液A，5min。缓冲液A：50mmol/L Tris-HCl 5mmol/L MgCl2 10mmol/ ...

1．细胞以1.5×105/ml细胞数接种于直径35ml培养皿中（内放置一盖玻片），培养1天，用含0.4％ FCS培养液同步化3天，使绝大多数细胞处于G0期。2．终止细胞培养前，加入BrdU（终浓度为30μg/L），37℃，孵育40min。3．弃培养液，玻片用PBS洗涤3次。4．甲醇/醋酸固定10min。5．经固定的玻片空气干燥，0.3％H2O2-甲醇30min灭活内源性氧化酶。6．5％正常兔血清封 ...

1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，稀释后直接在显微镜下计数效应细胞和靶细胞的结合率，即平均每100各淋巴细胞中结合了靶细胞的效应细胞的数目。3．其余的 ...

1．体外细胞培养结束后，去培养液，加入11％的戊二醛固定，置于振荡器上摇20min。2．固定细胞用去离子水洗涤至戊二醛液洗净。3．置空气或烘箱37℃彻底干燥。4．加入0.1％的结晶紫液对细胞染色，振摇30min。5．用蒸馏水洗涤，至多余的结晶紫液冲洗干净。6．置空气或37℃烘箱中彻底干燥。7．加入10％的乙酸对细胞吸收的结晶紫进行提取。8．1h后在酶标仪上测定光吸收度，波长595nm。 ...