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        BrdU标记法检测细胞增殖

        互联网

        3500

        1. 细胞以 1.5 × 105 /ml 细胞数接种于直径 35ml 培养皿中(内放置一盖玻片),培养 1 天,用含 0.4 FCS 培养液同步化 3 天,使绝大多数细胞处于 G0 期。

        2. 终止细胞培养前,加入 BrdU (终浓度为 30 μ g/L ), 37 ℃,孵育 40min

        3. 弃培养液,玻片用 PBS 洗涤 3 次。

        4. 甲醇 / 醋酸固定 10min

        5. 经固定的玻片空气干燥, 0.3 H2 O2 - 甲醇 30min 灭活内源性氧化酶。

        6. 5 %正常兔血清封闭。

        7. 甲酰胺 100 ℃, 5min 变性核酸。

        8. 冰浴冷却后 PBS 洗涤,加 1 抗即抗小鼠 BrdU 单抗(工作浓度 1 50 ),阴性对照加 PBS 或血清。

        9. ABC 法进行检测,苏木素或伊红衬染,在显微镜下随机计数 10 个高倍视野中细胞总数及 BrdU 阳性细胞数,计算标记指数( LI )。

         

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