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        肾小球分离与移植培养

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        SD 大鼠颈椎脱臼法处死, 75% 乙醇浸泡 1 2 分钟, 2 次,置超净台内,打开腹腔取出肾脏剪碎,置含 Hank s 液的无菌培养皿洗涤,置 80 目不锈钢筛网上。用扁平自制小铲轻轻碾磨产物微小组织透过筛网,滤过组织 Hank s 液混合物用吸管吸至 120 目不锈钢筛网,滤过,去小组织块,滤过物吸至 200 目不锈钢筛网,轻轻滤过, Hank s 液洗涤 1 次,收集网上肾小球,镜下观察为分离良好的肾小球。肾小球用 0.2% 胰酶、 0.1% 胶原酶, 37 ℃消化 20 分钟,加血清终止胰酶反应,离心除去胶原酶。处理过的肾小球计数后接种至 24 孔培养板或 25ml 培养瓶,使肾小球大于 60 /cm2 ,加培养基 5 10ml (培养基组成: F12 3T3 上清 1 1 5% 马血清; 2.5% 胎牛血清;胰岛素 5 μ g/ml 25ng/ml 氢化可的松; 5 μ g/ml 转铁蛋白; 25ng/ml 前列腺素 E1 ;甲状腺素 0.02ng/ml D- 缬氨酸 150ng/ml )肾小球培养 8 10 天,去除肾小球未生长组分,细胞继续培养 24 小时,形态学观察:细胞生长成单层多角型细胞,直径约 100 μ m

         

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