细胞信号转导

天使的密码 我想研究camp/PKA/CREB信号通路在糖尿病模型大鼠中的作用，我能否用PKA抑制剂灌胃给模型鼠，但我看很多杂志上都是采用细胞培养的办法，活体试验给予这些抑制剂可以吗？没有经验，请问各位前辈。holywater 不一定是实验问题，有可能是买不起那么多的抑制剂吧kern6549 活体不能用抑制剂。可以用基因敲除小鼠。maldinilee 还是用体外细胞培养吧，同意楼上用基因敲除。tacitlee 这种方法不可行。首先 ...

onlylittleghost 同标题，有遇到过这方面问题的同学吗？体内是camp-pka通路，体外（原代培养）是ERK1/2zaiju512 这个问题很值得思考holywater 恭喜你，可以发两篇文章如果找出为什么不同就是3篇本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

走过去 因为最近在查阅压力相关信号转导通路的文献，粗略的看了一下，似乎相关的文献不多，而且压力相关信号转导通路在听毛细胞的研究稍多一些，不知道哪位高手可以回答一下关于压力相关信号转导通路的研究，例如在充溢性尿失禁当中的进展等均可？谢谢，请拨冗指点。走过去 自己顶一下，再求助。zaiju512 我帮你顶一下本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shi ...

zoufly 初步实验知道了药物对细胞的增殖有抑制作用，接下来如何知道药物对细胞的这种作用是通过信号转导的哪一条通路发生作用的？是不是先用通路的信号转导的工具药先实验的？然后再做磷酸化蛋白的表达？如何是这样的话，哪里可以找到比较全的工具药名字？（是不是要激动剂和拮抗剂一起使用）。zoufly 怎么没有人回复，指点我一下？ronaldo_zj 楼主您好，我也是做药物对肿瘤细胞的增殖抑制作用的，对于您的问题，我有以下理解：1.既 ...

zhanghai123 大家好！我最近在做一种GPCR的信号通路的分析目前能够确定的是我的这种受体在我所用的细胞系中是与Gαi相偶联，以前公认是与Gq相偶联，然后我用H89处理细胞，确定PKA 参与其中的调控。可是，我用环腺苷酸环化酶抑制剂SQ22536处理，却没有发现能够干预这条通路。目前公认的PKA是cAMP依赖的一种激酶，可是现在的结果却是矛盾的。我想问一下大家：是否存在不依赖cAMP的PKA的活化方式？谢谢！ ...

fengbozhang 各位大侠：最近投了一个paper，是关于一个细胞因子激活STAT1通路，抑制ERK1/2通路而抑制肿瘤细胞生长的。老外的回修意见中，要求我做一个简单的小示意图，来说明作用信号传导通路。本人检索众多文献，发现无论STAT1还是ERK1/2，都很复杂，设计到很多的分子、染色体等，这个图该怎么简单说明一下呢？本人是搞临床的，弄这个东西实在很挠头啊！**高招！kern6549 审稿人的意思应该是让你做一个你 ...

miaoduan 刚刚开始做信号通路，激活和阻断后测相关分子1、阻断剂配成需要浓度，加入六孔板，一小时后把所需激动剂贮存液直接加到六孔板中（感觉这样会浓度不均），24小时后检测2、阻断剂配成需要浓度，加入六孔板，一小时后去除，配好同时含有阻断剂和激动剂的工作液，加入各孔，24小时后检测3、阻断剂配成需要浓度，加入六孔板，一小时后去除，加入配好的所需浓度的激动剂工作液（不含阻断剂），24小时后检测不知说清楚了没，这三种方法 ...

谁似我醉扬州 我做的是与wnt信号通路有关的，想了解某种药物诱导成骨是否和wnt信号通路有关，如果加药后β-catenin，LEF、CyclinD增加可否说明wnt信号通路被激活？β-catenin用的是western blot方法测定核内的，LEF、CyclinD用的是PCR的方法，这样设计实验合理吗？各位高手请帮帮忙，谢谢！谁似我醉扬州 怎么没人回答呢？丁香园不是很多高手吗？自己顶！ghy0601 现在所谓的核蛋白提取试剂盒 ...

谁似我醉扬州 我想证明某种药物诱导成骨与经典Wnt通路有关，实验应该怎么设计？需要测哪几个指标？cyclin 特异性抑制剂阻断wnt通路中的一些关键性分子，看药物处理对成骨的影响，以及检测药物诱导是否会激活wnt通路中的关键分子j19s87x 我们公司可以为你做完整个课题，有需要联系QQ：594051497本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号： ...

xxshc 我有A蛋白的转基因鼠和对照鼠。想证明A蛋白参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通路。TCR激活后可以激活ras，MEKK,MEKKK等。是不是我首先看各通路下游的蛋白磷酸化水平在两种鼠之间有无差异。有差异再向上寻找？是可以通过这个初步筛选吗？第一次做信号通路，希望得到大家的帮助。谢谢！kern6549 先不要找参与哪一条通道，先要确定是否参与anti CD3激活的T细胞受体TCR信号通道。可以用常规的活 ...

wachjun2000 请教各位高手，我最近打算做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用，想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题：1、NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体，也有文献采用的是磷酸化的抗体，所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核，所以测核内普通的NF ...

wachjun2000 请教各位高手！我最近打算做药物对肾脏疾病NF-KB信号通路的干预作用，想用Western Blot测定NF-KB p65活性。但是我在查文献及抗体的时候发现以下几个问题：1、NF-KB p65存在不存在磷酸化？如果不存在磷酸化为什么抗体公司用磷酸化抗体？2、一些国外的文献NF-KB p65活性测定采用的是普通的抗体，也有文献采用的是磷酸化的抗体，所以很不理解。园子的朋友说p65活化后入核，所以测核内普通的NF ...

第一号 园子里的各位战友及版主：本人在做抑制ＭＡＰＫ通道，对甲状腺癌细胞分化的影响。使用的抑制剂是U0126，按照文献报道，浓度是10um。但在加药后24h,可见细胞大量的漂浮（已排除污染），而国外文献报道，U0126要持续作用5天，且每天更换新液。请问，U0126对细胞有无毒性？为何我的细胞在作用24h后就见大量死亡？各位战友及版主能帮我分析分析吗？苍茫云海间 当然有毒，要做一剂量效应实验， dose-dependent effe ...

幽幽草sky 有谁用流式细胞仪检测过STAT-5磷酸化程度呀，求教具体方法，结果怎么样呀？kern6549 1、制备样品细胞的单细胞悬液。2、多聚甲醛固定细胞。3、打孔剂在细胞膜上打孔。4、标记荧光素偶联的抗磷酸化STAT-5抗体。5、流式上样分析。Crucial role of interleukin-7 in T helper type 17 survival and expansion in autoimmune disease. Nature Medicine. 2010. 16(2):1 ...

lichangeric 各位老师在下打算设计一个试验大致思路是这样的：药物作用于肺癌细胞Ras-Raf-MEK-ERK信号通路调控A基因表达。在下第一次学习搞通路，参考了了一些文献，但是还有不明白。请大家帮忙分析一下 请给些中肯的建议，我这个试验设计有何不妥？步骤？还有要检测几个激酶比较好？检测哪几个？通路应该设对照组对吧？也就是检测未用药物干预的和干预后细胞通路中的激酶表达做对比？ 呵呵 在下在这方面很弱，请大家指教。为表示感谢 ...

新手上路多包涵 拟通过体内外实验证明某化合物的神经毒性（通过Ca2+-CaMKII-CREB途径），设计如下，第一次做这样的实验，真心的、虚心请教各位老师指点初步设计为：“由氧化应激导致兴奋性氨基酸增加，通过NMDA受体激活钙通道”1、体内试验染毒后，取脑海马进行如下检测：采用邻苯二醛柱前衍生高效液相色谱法检测仔鼠海马兴奋性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)含量；利用NO和NOS试剂盒测定NO含量和NOS活性；采用Fura-2荧 ...

janhic11 我做TNF处理HepG2细胞，然后测定细胞通路的变化。问题是，细胞如何处理哦？1、细胞加TNF前，一般需要饥饿多少小时才能消除血清对细胞的影响？2、细胞饥饿后（我选的8h），而且加TNF的时候又不能加血清（因为血清含细胞因子，而且好像血清对信号通路有影响），细胞处理时间最长是24h。这样的花8h+24h=32h。细胞好像撑不住。。。。这问题如何解决哦?请高手指教！不盛感激wangyuanjing1004 关注中， ...

david52511 芯片发现一种新蛋白，前期甲基化，功能实验等已验证其是一种抑制肿瘤转移的基因，现在想研究其信号通路，并已通过CO-IP验证了与一条已知通路里的一个蛋白相作用，实验接下来应该如何设计更有意义呢？ylhuang0502 1. 用另一蛋白的siRNA转染细胞后，看你的新蛋白的抑制肿瘤转移的功能是否受影响，另外，看新蛋白的表达（mRNA and protein levels)是否受影响。2。另一蛋白有无抑制剂或激动剂，如有处 ...

olivial 最近在做细胞内信号转导通路PI-3K-Akt，关于它的抑制剂LY 294002的配制，说明书上写用DMSO，在做实验时设了vehicle（含等量DMSO）组，但发现DMSO对细胞（小胶质细胞）有影响，且DMSO与干预药有协同作用，MTT结果显示DMSO浓度=0.1%即对细胞造成损伤，而任何浓度DMSO（0.01%~0.1%）都与干预药有协同作用，乙醇的结果亦如此。所以想请教，大家在配LY时是怎么配的？在使用LY时是 ...

zsf神外 小弟求助，用什么方法来观察进出缝隙连接通道的物质？恳请各位高人指点。xiaodisun 我也想知道。你找到方法了吗？请教xiaodisun 我也想知道。请问你现在找到方法了吗？谢谢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming