• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        【求助】关于脑神经毒性的一个信号通路实验设计(体内和体外,关键是体外),请教中……

        丁香园论坛

        2313
        拟通过体内外实验证明某化合物的神经毒性(通过Ca2+-CaMKII-CREB途径),设计如下,第一次做这样的实验,真心的、虚心请教各位老师指点
        初步设计为:“由氧化应激导致兴奋性氨基酸增加,通过NMDA受体激活钙通道”

        1、体内试验
        染毒后,取脑海马进行如下检测:
        采用邻苯二醛柱前衍生高效液相色谱法检测仔鼠海马兴奋性氨基酸(谷氨酸和天冬氨酸)含量;
        利用NO和NOS试剂盒测定NO含量和NOS活性;
        采用Fura-2荧光探针法检测仔鼠海马细胞内钙离子浓度;
        采用磷酸二酷酶法测定仔鼠海马CaM活性;
        利用Western blot法测定大鼠脑海马CaMKⅡ蛋白表达水平;
        利用RT-PCR法(免疫组化法)测定大鼠海马CaMK II的基因表达水平;
        采用Western-blot测定仔鼠海马p-CaMKIV和p-CREB的蛋白表达水平;
        采用RT-PCR法测定仔鼠海马c-fos和 BDNF mRNA表达水平。
        采用RT-PCR法测定NMDA受体NR1亚单位酪氨酸磷酸化的变化。
        2、体外实验
        体外原代培养大鼠海马神经元,加入不同浓度的柠檬黄共同孵育后,
        2.1采用免疫细胞化学方法(SABC法)检测各组神经元p-CREB和CaMKⅡ蛋白的表达;
        2.2RT-PCR法半定量测定CREB下游基因脑源性生长因子(BDNF)的表达;
        体外实验,还可增加什么指标?请教老师们哈,谢谢
        c-fos,p-CaMKIV,CaM,NMDA受体要不要测?如果需要测,是不是可以和p-CREB、CaMKⅡ同时测定?
        关于毒性研究,有没有必要加抑制剂实验?
        继续请教中,

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序