细胞培养

大鼠心肌细胞比乳鼠心肌难养，用无血清培养基，呈杆状，横纹清楚，在培养基里细胞不搏动。 大鼠心肌细胞分离一般是采用二型胶原酶分离，浓度为1mg/ml（用无钙台氏液配制），同时酶液里加入牛磺酸，BSA。一般采用Langendorff灌流的方法，大鼠开胸后，迅速取出心脏，放入冰的台氏液中，找到主动脉后，挂上Langendorff装置，衡流泵灌入无钙台氏液（37度），开始心脏会搏动几下，这样把心脏中的淤血 ...

Percoll密度梯度离心分离法： 1、Pcrcoll混悬液的配制：Percoll 90mlHBSS 9ml HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3)HCL(1mol/l)0.4ml 调节至PH7.4 2、制备Percoll密度梯度管 密度 Percoll/HBSS(ml/ml) 1.070 24:20 1.079 27:15.9 1.088 23:10 3、加分层液的顺序：底层先加 ...

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一、取得完全无血液残留的肺脏： 实验前j将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏 二、消化肺组织： 常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定，有效作用时间短暂，容易自我降解等问题。Dobbs L G等认为弹性蛋白酶能更有选择性的消化分离上皮细胞。胰蛋白酶消化没有选择性，会 ...

开始时，我的细胞用胶原酶消化5h接种玻璃培养瓶，1.5h后吸出细胞液至另一培养瓶培养以去除成纤维细胞，原瓶内成纤维细胞加培养液继续培养，24h观察，发现转瓶后心肌细胞未贴壁，培养液中为大量细胞碎片状东西以及未贴壁的细胞悬浮，仅见极少量的成纤维细胞贴壁生长，接种24孔板也是这样(24孔板为新，非重复使用)，接连几次都是这样，很是郁闷。而原瓶内分离的成纤维细胞生长良好，且可见少量心肌细胞贴壁成团生长， ...

材料 1、实验动物： 孕13d的昆明种二级小鼠。 2、主要试剂 主要试剂 来源 DMEM/F12 GIBCO rh-EGF peprotech rh-bFGF peprotech B-27 supplement GIBCO HEPES Sigma Trypsin Sigma Ploy-L-lysine ...

一周龄大鼠，断颈处死，活力碘消毒无菌取出肝脏，于无菌维持液中漂洗，用眼科剪仔细清除肝包膜韧带沿肝边缘剪切肝尖组织(绕开肝蒂等)转入青霉素小瓶中，用眼科剪绞碎剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，加入5倍体积无菌维持液用滴管轻轻吹打吸出上层血细胞再用无菌维持液反复清洗3~5次，加入10倍体积无菌胰蛋白酶消化液37℃消化，消化过程中不断震荡，至组织块边缘变薄(镜下观)离心(1000rpm10分钟)弃去上 ...

1、将静脉血20ｍl用ACD抗凝剂以容积比血：抗凝剂＝9：1抗凝处理 2、按血：分离液＝1：2注入国产淋巴细胞分离液上层，400g 20℃离心30分钟 3、交接层重浮于4倍体积的RPMI1640并通过离心法200g，10min洗三次 4、获得细胞可做分选或其他实验。 体会： 1、实验中我用过肝素方法抗凝，但效果不好，因为肝素抗凝后交接层混浊，洗涤后没有细胞。后来是一位老师推荐我用ACD抗凝剂，效果 ...

1、将切下的组织在手术台上请护士将标本放入低温生理盐水中（可不要动它），在手术完成时将标本放入PBS冰水液中并放入消毒的容器中带回实验室； 2、在超净台中将标本放入培养皿中，加入α-MEM洗涤； 3、获得组织切开，仔细辨认于关节反折处及增生的白色光滑的滑膜组织，附于关节软骨面的增生的血管翳也为滑膜组织（可作另一管消化），仔细剔除脂肪组织，用α-MEM洗二次（以去除红细胞）， ...

(1)大鼠断颈处死后，无菌取脾置于消毒平皿中称重; (2)超净工作台上置10cm直径无菌平皿，加入5～10ml D-hanks平衡液 ，置一80目的不锈钢筛于平皿中，脾脏置于筛网中，用剪刀剪碎脾，用5ml玻璃注射器针芯轻轻捻磨脾脏，使分散的细胞滤过金属网进入平皿的液体中， D-hanks冲洗一次； (3)用吸管吸取冲洗液，200目的钢筛过滤一次后收集至离心管中； (4)1000rpm，离心5～10 ...

准备的药品：pbs199培养液，I型胶原酶（SIGMA）。 主要的器械：手术剪，镊子，止血钳，丝线，鞘管（PTCA用的动脉鞘的扩张管，6F或7F）。 首先，以PBS漂洗脐带1-2次，用剪刀将脐带剪成数段15CM左右长短（本人认为这个长度较为合适）。 之后，以止血钳提起一段脐带的一端，将鞘管插入脐静脉中，并经该鞘向静脉内注入PBS10-8ml左右（最后注入空气吹净残留液体），后以丝线将另一端结扎（一 ...

实验步骤 采血： 需要在严格无菌条件下采血。肝素抗凝，室温保存，24hr-72hr转化效率高。也有保存更长时间，采血后不要将血液置冰箱中，长途运输也不要冷藏。 分离淋巴细胞： 采集血液4-5mL，与2mL1640（含1%双抗）在离心管内混合，然后缓慢沿管壁注入淋巴分离液（已37℃预热），3000rpm离心30min。 收集白细胞层，转移至另一离心管中，加入10mL1640（含1%双抗），轻轻吹打均 ...

材料和方法 1、仪器： 手术器械一套，倒置显微镜（Leica）CO2细胞孵育箱（Heraeus），超净工作台（苏州净化设备有限公司），扫描电子显微镜（Hitachi）。 2、主要试剂 DMEM高糖培养基（Gibco），胎牛血清（Hyclone，杭州四季青生物工程材料公司），胰蛋白酶、EDTA（Ameresco）；小鼠抗人CD105单克隆抗体（NeoMarkers），兔抗人CD34、CD31多克隆抗 ...

将出生2天以内的新生SD大白鼠10只，用75%的酒精浸泡消毒后，采用无菌方法迅速取出大脑，用冷的D-Hanks液清洗并剔除脑膜和血管，取大脑皮质，将组织剪碎为1mm3，用0.125%胰蛋白酶37ºC消化10分钟，过滤（200目尼龙滤网），离心（1000rpm 10分钟），去上清，加入DMEM/F12完全培养基（其中含10%胎牛血清，10%马血清，L-谷氨酰胺2mmol/L，青霉素100u ...

1、细胞培养所用溶液及其配制 1×RPMI1640及：按照产品说明配制，过滤除菌，4℃保存备用。 新生牛血清：56℃灭活30min，-20℃保存备用。 2×104U/ml青、链霉素液（双抗）：青链霉素各2×106 U溶于100ml灭菌双蒸水中，过滤除菌，分装，-20℃保存备用。 10×Na2EDTA-胰酶溶液（2.5%）：Na2EDTA 0.2g，N ...

一、摘要 目的：建立兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定的方法。方法：成年新西兰白兔两只（正常及梗阻各一只），采用酶法分离技术获得膀胱平滑肌细胞后于10%小牛血清的DMEM中培养，观察细胞形态和扩增情况，用爬片染色、电镜、蛋白质α-肌动蛋白（α-actin）鉴定细胞类型。结果：倒置显微镜下观察均呈“谷和峰”样结构、细胞爬片HE染色及电镜检查均证实为平 ...

新生1-2天Wistar大鼠乳鼠，经75%酒精消毒，断头处死，取脑放入冷的D-Hanks平衡盐溶液，去除脑膜及大血管。分离两侧大脑皮质并剪成1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空气浴震荡消化10 min，用含10% FBS的DMEM培养基终止消化，离心1000rpm 10min，去上清，再用含10% FBS的DMEM培养基重悬沉淀，经75µm筛网过滤，收集滤液，离心1000rpm ...

溶液以及器材： 1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml 2、配三抗： 青霉素：100ku/L 链霉素：100ku/L 庆大霉素：100ku/L 3、培养液（M199＋ECGS＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml 4、大瓶生理盐水 5、广口瓶（脐带数＋1） 6、止血钳（脐带数×2＋2） 7、大针头数个（用于吸取生理盐水，胶原酶） 8、手术剪刀数把 使 ...

收集足月顺产或剖腹产新生儿脐带，保存于5%糖盐水中，4℃。(脐带在4℃ 5%糖盐水中保存时间不超过24h)。在超净工作台上将脐带取出，置灭菌弯盘中，用生理盐水冲洗脐静脉至冲出的液体不含红细胞。钳闭脐带一端，从另一端向脐静脉内注入37℃预热的0.25%胰蛋白酶，钳闭另一端。置37℃的生理盐水中10~15min。取出脐带，松开一端钳子，放出消化液，加入含15%新生小牛血清的M199培养基以终止反应。离 ...

1.材料和方法 1.1 DMEM/F12条件培养液（亚硒酸钠40μg·L-1，腐胺16.2 mg·L-1，转铁蛋白100 mg·L-1，胰岛素234U·L-1，甲状腺素0.4μg·L-1，黄体酮0.62 mg·L-1，谷氨酰胺3g·L-1）。DMEM/F12培养基、小牛血清购自Hyclon ...