细胞培养

1、如何选用培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI- 1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的首选是AIM V培养基（SFM） 2、为什么要热灭活血清？ 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件，刺激平滑肌收缩，细胞和血小板释放组胺，激活淋巴细胞和巨噬细胞。在进行免疫学研 ...

体外神经细胞的培养已成为神经生物学研究中十分有用的技术手段。神经细胞培养的主要优点是:(1)分散培养的神经细胞在体外生长成熟后能保持结构和功能上的某些特点 而且长期培养能形成髓鞘和建立突触联系这就提供了体内生长过程在体外重现的机会。(2)能在较长时间内直接观察活细胞的生长、分化、形态和功能变化便于使用各种不同的技术方法如相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、激光共聚焦显微镜、同位素标记、原位杂交、免 ...

概述 Spallanzani（1776）最早发表了冷“处理”对“细胞”生命活动影响的报道，他用雪冷冻玻璃瓶中的马精子10多分钟之后，再将玻璃瓶放回室温下，发现了一个令人惊奇的现象，那些原本已经不动了的精子又“复活”了，就好象是刚从输精管排出来的一样，冷处理延长至数十分钟，情况依然如此。于是，他认为冷不能杀死精子。大约100年 ...

1、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。 2、优质血清 目前，大多数合成培养基都需要添加血清。血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。 3、无菌无毒细胞培养环境 无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。在体 ...

1、原代培养： 健康成年白家兔空气栓塞处死立即取出眼球1∶1000庆大霉素生理盐水冲洗干净置超净工作台无菌操作。角膜缘剪开去除角膜、虹膜将晶状体前囊膜连同赤道部囊膜撕下Hank液冲洗剪成1mm×1mm小块上皮面向下置25mL组织培养瓶内贴壁培养。把培养瓶轻轻翻转加入适量的加入含15%胎牛血清的DNEM营养液囊膜片在瓶内的上面而培养液在下面。置于37℃、5%CO2、95%空气、100%湿 ...

材料与试剂： 镊子、剪子、培养皿 离心管、培养瓶、吸管、滴管 200目筛网 胶原酶（10ml）（20mg胶原酶、200mg牛血清白蛋白、10毫升双蒸水）国外也用培养基配. 方法： 1、取无菌条件下新鲜切除的人腹部皮下脂肪组织约5－10克，放入培养皿，用1×PBS冲洗2－3次，充分洗去血污，剔除结缔组织和可见血管。 2、充分剪碎脂肪组织为1mm×1mm的小块。 3、将其加入到 ...

材料与方法： 材料 : 培养皿、培养瓶、烧瓶、试管，玻璃针等。 眼科剪、眼科镊、手术刀片。 5%CO2孵箱、PH计。 恒温水浴箱。 PMi1640培养基，D-Hank’s缓冲液 、胎牛血清，内皮生长因子（ECGF），青霉素，链霉素戊巴比妥钠等。 方法： 1、取材：4～6ｗＷｉｓｔａｒ大鼠 大剂量2%戊巴比妥钠麻醉处死，将处死后的大鼠浸入75%酒精中，放入超净台。在无菌状态下剪开胸腹腔 ...

倒去培养基，先加入PBS1ml，再加入0.25％胰酶1ml，轻轻晃动培养瓶，使之分布均匀；约10秒。 将培养瓶迅速转至镜下观察，镜下见细胞触角变钝，细胞变圆，将瓶侧立回到无菌台内，到掉胰酶，加入2mlDMEM培养基（内涵20%胎牛血清），终止消化，弯管吹打成单细胞，可再在镜下观察，确定是否吹打完全。 按1：3或1：2传代，加入适量新鲜培养基后，1.5-2.0ml。放入CO2培养箱。 注意：时间宁短 ...

取引产胎儿肾，无菌操作，1小时内完成。2用生理盐水冲洗干净。 取肾皮质，用小外科剪剪成碎麽。依次研磨过80目，100目，200目筛网，不断用生理盐水冲洗，最后在200目筛网上收集肾小球， 先用0。4%的胶原酶四消化半小时，接种于50ML的培养瓶里，加含有20%小牛血清的DMEM培养基放二氧化碳培养箱培养。 三天后可在倒置镜下观察见有细胞贴壁生长。 一周后换液一次，以后约三到四天就能长满瓶底。 此时 ...

1) 细胞消化液的配制及存储：我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液，BUFFER采用的是D-Hank's液。配完后分装成4-5ml/tube，于-20度冰箱中储存。 2) 消化前的处理：当细胞生长至亚融和状态需要传代时，提前半小时将配好的消化液放在细胞培养孵箱中预热，同时将配好的高压无菌的D-Hank's液也进行预热。 3) 消化细胞：将预热的D-Hank's液洗细胞2次 ...

（1）准备大量的3T3细胞，每个安瓿瓶装1－1000000个细胞，然后冻存。使用的细胞不超过20代。 （2）将3T3细胞加入175cm2的培养瓶中，用含有10％小牛血清DMEM培养。案每平方厘米15000个细胞接种。2天后换液，每4－5天传代。 （3）通过60Gy X射线或Co饲养细胞灭活。被照射的3T3细胞在4度条件下可存放3－4天。 （4）在无照射源的条件下，用丝裂菌素C灭活饲养细胞。 （5） ...

换液过程 50ml 培养瓶弃培养液，加入培养液3ml冲洗一次。 加入10ml培养液 传代 弃培养液 D-hank's 冲洗1次 0.5%胰蛋白酶和0.1%EDTA 2：1 比例1ml洗一次 6ml消化。 第一次传代是很难消化，需要在倒置显微镜下观察，有60%细胞脱壁时 吸出全部消化液立即加入含10%血清的培养液种植消化。 含有细胞的消化液离心800g 10min分离细胞，然后用10ml培养液打散细 ...

心得如下： 1、 GES长的非常快，而且比较大，呈成纤维细胞样，细胞长得越好，铺的越开。 2、传代一般1：3传，每3天需要再传。 2、永生化细胞，不要等细胞100%汇合再传代，多次这样细胞容易球形增加，还不容易洗掉。 3、用胰酶（0.25%）--EDTA（0.01%）混合消化液消化好些，一般1分钟左右呈球形，即可混悬细胞了。 4、培养液用10%小牛血清的DMEM或1640都可以。 步骤： 吸净培养 ...

我养的是膀胱癌 T24细胞（贴壁的）。心得如下： 1、 T24长的非常快，传代一般1：5传，每4天需要再传。 2、虽然是永生化细胞，也一定不要等细胞100%汇合再传代，多次这样细胞状态不好，球形增加，还不容易洗掉。 3、要用胰酶（0.25%）--EDTA（0.01%）混合消化液消化好些，一般1分钟内呈球形，即可混悬细胞了。 4、培养液用10%小牛血清的DMEM或1640都可以。 步骤： 吸净培养液 ...

我说说我们实验室传代的一般方法，这一方法较简单，不需要离心，而且消化后细胞很少聚集成团，具体步骤如下： 1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液，按1：1 的比例加入适量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培养瓶各加2滴管消化（消化时不要晃动培养瓶，以免消化不完全而导致细胞成片脱落，从而导致细胞成团，无法吹散）。 2、消化致细胞变圆，细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时，吸尽胰酶和EDTA。 ...

1、倒掉培养液用D-HANKS洗两次 2、加入0.125％胰酶/0.02％EDTA（1：1），盖满瓶底为宜。 3、将培养瓶放置显微镜下进行观察，发现细胞间隙增大，突起回缩后竖起培养瓶，倒掉消化液。 4、用D-HANKS洗一次，此时动作要轻 5、加入完全培养液，轻轻吹打混匀，接种至培养瓶中。 注意： 1、0.125％胰酶/0.02％EDTA的PH值和温度重要，即PH值（7.5），温度 （37℃） 2 ...

1、吸尽旧的培养液（因为我是养在培养皿) 2、用D-HANKs清洗一次 3、加入0.125%/0.02%EDTA的胰酶(盖满皿底即可)。肉眼观察即可，看见皿底有一层薄雾。 4、加入完全培养基，以终止胰酶作用。 5、轻轻反复吹打细胞。 6、吸出一部分加入新的培养皿中。 注意： 1、可以用MEM或DMEM 2、EDTA可使细胞分散 3、BHK-21生长迅速 ...

都是贴壁细胞，在消化传代过程中，步骤如下： 倒尽旧的培养液－＞用无血清的培养基清洗一两次－＞加入一定量的胰酶，置于37度培养箱中5--10分钟，使细胞悬浮－＞显微镜下观察，待细胞大部分变圆时，回到超静台－＞加入一定量的含血清的新培养液，以终止胰酶作用－＞反复吹打细胞－＞再置显微镜下观察，直到细胞全部悬浮起来－＞吸出一部分加入新的培养瓶中－＞最后再补充加入一定量新的培养液。 注意：　 1、吹细胞时尽 ...

大多数朋友说推荐培养液为DMEM加10%胎牛血清，1%谷氨酰胺，我们这里用1640加10%新生牛血清，效果也不错。DMEM不容易观察，有时候等DMEM黄了的时候，细胞已经严重缺乏养料，1640颜色变化比较明显，也比较符合细胞当时的情况。 细胞置于5%CO2、37度培养细胞生长较快，根据你留在瓶里细胞的数量，50％两天后传代一次。0.25%胰酶＋0.01％EDTA消化，该细胞容易抱团，我是一般先用胰 ...

传代步骤比较传统： 倒掉培养液－>PBS洗2遍－>胰酶0.25%消化－>倒掉胰酶－>加培养基－>用吸管吹打均匀－>分瓶－>放置37度，5%CO2孵箱。 我的体会是： 1、消化时间和实验环境温度也有很大关系，我们实验室条件比较差，不能维持恒温（不过我想大部分实验室目前也还是做不到的）。夏天的时候，消化特别快。但是到了冬天，就很慢，要用手捂老半天。 2、消化到 ...