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        小鼠成肌细胞C2C12和人横纹肌肉瘤A204细胞的消化传代

        互联网

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        1) 细胞消化液的配制及存储:我采用的是0.25%Trypsin+0.05%EDTA的消化液,BUFFER采用的是D-Hank's液。配完后分装成4-5ml/tube,于-20度冰箱中储存。

        2) 消化前的处理:当细胞生长至亚融和状态需要传代时,提前半小时将配好的消化液放在细胞培养孵箱中预热,同时将配好的高压无菌的D-Hank's液也进行预热。

        3) 消化细胞:将预热的D-Hank's液洗细胞2次,2ml/25cm2,然后再加入预热的消化液,作用3-5min,并反复振荡,镜下观察。当细胞被消化成单个圆球状时,加入等体积的培养基中止消化,然后反复吹打,将消化后的细胞悬液,全部吸出后置于离心管中离心,1000rpm,10min。

        4) 传代接种细胞:离心完毕后,弃去上面的上清,加入新鲜预热的培养基,并计数,按要求接种的密度接种到新的培养瓶中即可。

        这种方法的优点是:细胞消化彻底,损伤小,接种均匀,易于控制密度等。

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