细胞培养

我养的是RAW264.7细胞株，前面有战友都提到过这种细胞的消化传代，但是因为这种细胞最大的特点是贴壁特别强， 每次传代都很难消化下来， 刚开始使用胰酶消化，发现37度， 消化15min细胞也还是吹不起来，后来又用单纯的用细胞刮刀刮的办法，但是这样养了一段时间，发现细胞损伤非常大，贴壁性变差，生长缓慢，后来使用了现在这个方法，到现在细胞的生长状况一直很好! 简述如下： 1) 将培养瓶内旧的培养液弃 ...

我也在养A549细胞，也来讲讲自己的经验，希望大家共同学习。 我们主要是看细胞的密度，大概有80-90%铺满培养瓶底就可以传代了，时间长短不一，大概有5-7天吧，一瓶一般传3-4瓶，中间一般会有一次换液的。 培养基用的是1640+10%的小牛血清+200u/ml庆大霉素。传代时先倒掉就培养基，然后用PBS洗一两次，然后再用0.25%胰酶消化（100ml培养瓶盖住表面大概要两滴管左右），可镜经下观察 ...

弃血清---PBS洗一或两遍---加1-2ml的消化液（0.1%的胰酶+0.02%的EDTA）消化45秒作用（不用放回培养箱，细胞面紧贴自己的手掌心，平放）---弃去胰酶后让残留的胰酶再作用1分钟----立即加含血清培养基终止胰酶的作用---轻轻吹打细胞很容易就脱离瓶壁。注意，吹打次数不要太多，机械损伤对细胞的损害非常大，吹打过程中也不要有太多气泡，以免气泡的剪切力损害细胞。 一般而言，细胞消化传 ...

吸出培养瓶中的培养基用Tr-EDTA洗1次； 加入刚解冻的Tr-EDTA少量，轻轻摇晃，让所有细胞与其充分接触。置于37度培养箱作用2-3min 在镜下看到细胞圆缩，右手拿细胞瓶呈水平方向与左手掌托（肉较多处）轻轻磕n次，可以看到细胞哗哗往下掉，立即加培养基终止消化。 用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：3分瓶。 ...

我养了三种贴壁的细胞，用同样的消化方法，都很好。这三种细胞是A549，ECV304，2BS。 1、0.25%胰酶新鲜解冻不需要预热。 2、倒掉培养瓶中的培养基并用预冷的D-Hank‘s洗两次（要冷，用前4度中取出）。 3、加入约1-2ml的胰酶晃动瓶子使液体浸润瓶底。 4、超净台上放置约1-2分钟（2BS需要的时间更短，约1分钟） 5、镜下观察（我一般都省略了，因为每次的效果都很好）见 ...

1、 0.25%胰酶先解冻，并置入孵箱中预热20分钟。 2、 倒掉培养瓶中的培养基，并用PBS洗两次。 3、 加入月1.5ml的胰酶，并晃动瓶子，使液体浸润瓶底。 4、 将瓶置入孵箱约2分钟 5、 镜下观察，见细胞边缘折光增加，即可加入含血清的培养基终止消化。 6、 吹打20次左右，细胞就能脱壁了。 7、 稀释，分瓶接种 ...

细胞：猪肾细胞系(IBRS-2) 猪 国内 来源： 猪 生长类型：贴壁生长 传代步骤： 弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞３次并到尽所有液体-->加入１ml无钙镁水，用巴氏吸管滴１－２滴２.５％的胰酶-->放入37度二氧化碳温箱中消化１－２-->弃去胰酶，加入２０ml含１０％小牛血清的ＭＥＭ生长液，拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分2瓶--& ...

293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，293T细胞由293细胞派生，同时表达SV40大T抗原，含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。 大家注意293T细胞的一个重要特性：室温下不贴壁，但37度时可以重新贴壁。 我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的，当时正是冬天，老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天，等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。我以为在外面这么久细胞可能已 ...

此种细胞的培基最好用是DMEM！以前我们用1640，但生长及其缓慢。 正常情况下，2天换一次液4-6天传代一次. 传代过程： 1、直接倒掉DMEM培基 2、pbs将细胞洗2次 3、倒掉pbs 4、加入0.25％胰酶（0.02%EDTA）1－2ml/培养瓶 5、水平放置培养瓶，消化3－5分钟 6、显微镜下观察：细胞形态变圆，而且细胞间界限明显后，或有极少数细胞漂浮起来就可终止消化。 7、加入完全培基 ...

特性：悬浮细胞 培养条件：37度 5% CO2培养（方瓶站立培养） 营养需求：1640+15%FCS+10%TPB+100U双抗+100U两性霉素，状态不佳时适当地加2%鸡血清或2%马血清 生长特性：细胞对密度没有高的要求，生长较快；但对pH值要求高，需要在6.8-7.2，不能过高。 传代：对于隔夜的细胞只需要将细胞分为两/三孔/瓶即可，对于细胞液过酸时，则将细胞悬浮，1000rpm离心后，弃取上 ...

培养条件：RPMI-1640培养液，10%（胎牛或小牛）血清，5%CO2，37度饱和湿度孵箱培养。 细胞生长状态：上皮样贴壁生长。 传代： 细胞长满95%->弃培养液->0.25%胰酶消化2min->弃掉胰酶->加入培养液吹打贴壁细胞，将细胞悬液分瓶传代。若一传二，则3天长满；若一传三，则需要4-5天长满。 ...

我和师兄是从04年初就开始用LLC-PK1细胞系筛选多种类型的、数量极多的各种可能有用的新药，摸索发现消化液的配方为0.25％的胰酶+0.02%EDTA 就行了，要配在PBS中，如果能加Hepes那就更保险了（有一次实验室Hepes用光了，配液时没加Hepes，照样没问题） 消化步骤：吸走培液后最好用PBS过一遍－>50ML培养瓶加2ML在37ºC预热消化液－>37º ...

吸出培养瓶中的培养基，用PBS液洗涤1-2次； 加入已经在37度预热的消化液(0。25%胰酶+0。02%EDTA)少量(估计可以平铺培养瓶底部即可）； 在镜下看到细胞退缩变园，立即给予少量培养基终止消化，我一般的消化时间就在1分钟之内很好消化； 再用弯管吹打细胞成单细胞悬液后，按1：2或1：3分瓶即可。 ...

细胞复苏后，在显微镜下观察大约有80%~100%的细胞已经贴壁时用新鲜的培养基换掉原来的培养基，去除DMSO对细胞的毒害，估计复苏到换液的时间为0.5~1.5h。 2~3d细胞长满后传代，传代前先把培养基和0。2%的胰酶从冷库放到室温1~2H，由于冷库中的培养基温度与在温房的温差很大，这样做可以防止细胞"感冒"，然后把培养瓶中的废液倒掉，加入约5~10ml胰酶，把培养瓶平放使胰 ...

大鼠骨髓经ficoll分层后培养。一周换液2次。三周后，可以传代了。然后大约7天可以传代一次。跟das1977网友的方法稍微有点不同。 1. 弃去旧培养液。 2.预热的PBS液轻缓漂洗细胞两遍，尽量洗去残余血清，弃去PBS 3 加0.25%胰酶0.05%EDTA于37度条件下消化，约两到三分钟，倒置相差显微镜下观察，细胞缩成圆形漂浮为准。我还用手轻轻击打培养皿的两侧，希望可以加速其消化。实验室里的 ...

HEK 923 subculture method in CELL Biology 1. prepare the devices in the hood such as the pipette and flask(T-75) petri dishes(4undefined10) 2.prewarm the CDMEM DPBSTE(the combination solution by trysine and ...

人胃腺癌细胞MNK-45体内传代及接种实体瘤的详细步骤： 1、收集对数增长期的MNK-45细胞若干瓶制备成瘤细胞悬液undefined10^8个/ml左右接种到裸鼠胁部皮下。 2、待肿瘤生长到0.8g左右时，选择1-2只荷瘤（瘤块必须要求生长良好且无破损）裸鼠，颈椎脱臼处死，置75%酒精浸泡1-2分钟后裸鼠置超净工作台，于无菌条件下，剥取瘤块并将瘤块置200目细胞筛用玻璃棒研磨后用生理盐水或培养液冲洗，并用1容 ...

Bcap-37和MDA-MB-435细胞都是人乳腺癌细胞，培养液用DMEM或1640均可，小牛血清10％就足够，不过感觉435细胞用DMEM长得更旺一些。 两种细胞都很好养，Bcap-37可称为是最漂亮的乳腺癌细胞，一个个成排列均匀的瓜子状，形态规则，长得也快，一般1：2传代后2－3天即可长满。435长的较慢，需4－5天。 传代常规用0.25％的胰酶消化后用含血清的培养基终止消化，视消化程度而决定 ...

一、准备工作对开展细胞培养异常重要，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试等。 1、清洁、消毒、液体 直接接触细胞的用品要超净处理——无非必须分子 直接接触细胞的用品要彻底消除微生物 超净和消毒过的样品要绝对密闭保存，标记消毒时间 ...

污染的类型 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。 一、细菌污染 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素(一般为预防剂量)，也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。 培养细胞受细菌污染后，会出现 ...