1.取材:妊娠后第13天取材,取数个同窝胚胎,去头和内脏,在无菌条件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰蛋白酶(含0.01%EDTA)37℃消化30分钟,滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中,接种密度10~20×106/75cm,37℃培养2~3天,在顺利情况下能迅速长满瓶面。2.贮存:选大批生长状态良好的细胞冻存,储以备用。3.致癌物处理:取冻存细胞,解 ...
线粒体荧光探针信息大全 (Probes for Mitochondria)包括各种常用探针,如JC-1,JC-9,TMRM,TMRE等Mitochondria are found in eukaryotic cells where they make up as much as 10% of the cell volume. They are pleomorphic organelles with ...
1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液,计数,令细胞密度达5×106/ml,离心去上清,吸入离心管中。3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液,按上法一滴滴加入离心管中,然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。4.分装:分装入无菌安剖中,每安剖加1.5毫升细胞悬液。5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安 ...
一、原理 骨髓染色体标本制备通常用于白血病患者,特别是慢性或急性粒细胞性白血病,因为骨髓反映粒系统细胞增生情况,这些病人不宜用外周血。即使是淋巴细胞性白血病,也不主张用外周血,因为加PHA刺激外周血培养,只能获得正常淋巴细胞分裂相,并不能反映那些病理淋巴细胞的染色体改变。 骨髓细胞属不断增殖的细胞,培养可分短期培养和直接制片法,无论哪种其培养液中均不需加PHA。 二、用品和试剂 同外周血染色体制备 ...
一、原理 1976年Goodpasture等应用银染色技术,使9种哺乳动物的核仁组织者区(NORs)特异性的染为黑色,该技术被称为Ag-As的银染技术,银染色阳性的NORs被称为Ag-NORs,与Hsu等人用原位分子杂交得到的结果比较,表明Ag-NORs就是18S+28S核糖体基因(rDNA)的分布区,后证实染色的不是rDNA基因本身,而是与rDNA转录有关的一种酸性蛋白。因此,银染色的是 ...
摘要目的: 进一步探讨促凋亡蛋白Bid 在肝癌发生发展过程中的作用.方法: 应用基因毒性化学剂二乙基亚硝胺(diethylnitrosamineDEN)制备肝癌动物模型通过阻断肝细胞凋亡信号传导途径观察肝癌发生过程中肝细胞的增生指数(BrdU LI)与凋亡比率(AI)及与肿瘤发生的关系.结果: (1)在DEN用药后的第3 d 和第10 d 野生型小鼠肝细胞BrdU标记指数和凋亡细胞百分比分别明显高 ...
一、配制用水 培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。 二、培养基 培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2~7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能 ...
广东省中医院麻醉科(广州市,510120) 项红兵 招伟贤华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科(武汉市,430030) 董航 疼痛敏化调控的细胞机制尚未阐明。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)家族是将胞外刺激信号转换至胞核内产生转录和翻译后效应的细胞信息传递的共同通路之一,其在疼痛敏化调控的病理生理变化中起了重要作用。 MAPK; ...
基本原理 :本方法是通过促细胞分裂剂与细胞表面受体相互作用,在体外触发细胞的多克隆激活。根据所使用的促细胞分裂剂的不同,应答细胞可以是T淋巴细胞、B淋巴细胞,或两者同时,或者是单核细胞。 细胞激活可以通过细胞增殖、细胞因子分泌、表面抗原表达和/或细胞体积的增加进行检测。例如在使用B细胞激活剂时,可以通过多克隆免疫球蛋白的分泌进行检测。表1 常用的促细胞分裂剂和多克隆淋巴细胞激活剂 ...
肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。一、组织培养肿瘤细胞生物学特性肿瘤细胞与体内正常细胞相比,不论在体内或在体外,在形态、生长增值、遗传性状等方面都有显著的不同。生长在体内的肿瘤细胞 ...
1. 临床意义心肌梗塞、脑血管血栓形成、深静脉血栓形成、脑栓塞和肺栓塞等血栓性疾病在中国有很高的发病率,也是致死的重要原因。血小板活化是血栓形成的重要环节,检测血小板的活化状态可辅助诊断和监控血栓性疾病,对判断血栓前状态意义也非常重大。2. 检测原理静止状态的血小板内分布着多种颗粒,如a颗粒、溶酶体颗粒等。这些颗粒表面存在着一些特定蛋白,如a颗粒表面有CD62p抗原,溶酶体颗粒表面有CD63抗原。 ...
细胞分裂素在植物生长和发育过程中通过调节细胞分裂和细胞分化起着非常重要的作用。尽管经过几十年的生物化学和遗传学研究,对细胞激动素作用机制和信号转导途径的了解仍极为有限。我们采用一个新颖的功能获得性遗传筛选系统,已分离鉴定了数个拟南芥的细胞分裂素信号转导突变体(pga突变体)。pga属于条件性功能性获得性突变,其靶位基因的表达受到化学诱导剂(哺乳动物雌激素;雌激素对植物的正常生长发育无可检测到的影响 ...
市场上供应的大多数培养液的配方非常接近,这使得细胞很容易适应新的培养液。这里我将详细介绍一个方法,这个方法是保守的,在大多数情况下可以进行删减一些步骤。最简单最节省时间的情况是把细胞直接分装到新的培养液中,观察几代以保证细胞的生长参数是可以接受的。这个方法适于悬浮细胞,不过也很容易扩展到贴壁细胞。 细胞的生长参数 1.翻倍时间(Doubling Time) 细胞的翻倍时间在评价昆虫细胞健康程度的 ...
一、原理 人的羊水细胞能长成单层并可连续进行传代培养,但它们的一些特征与一般成纤维细胞不同。在羊水中存在着各种不同类型的胎儿细胞,依据其外形和生长特征可区分为以下三类:上皮细胞(E)、成纤维细胞(F)和羊水细胞(AF)。E细胞在胰酶消化的连续培养中不再生长,所以在培养过程中的生长期最短。AF细胞在再培养中一开始就长得很好,染色体分析大多用这类细胞。F细胞在再培养中潜在的生长期最长,在较老的羊水培养 ...
一、原理 异染色质在整个分裂间期及分裂期都是浓缩的,因而其大小较为恒定。它们通常位于着丝粒附近,或在染色体臂上呈现“团块”,这些染色质主要由C显带技术呈现,故称为C带。CBG即C带、Ba(OH)2、Giemsa的简写。C带的根本特征是选择性地从染色体臂抽取DNA,但在C带区有很强抗性,仍保留大部分DNA,Giemsa染色后可见效果良好的C带。抽取DNA的过程由三个连续操作形成。首先,酸处理 ...
重组人TFAR19 蛋白对羟基喜树碱诱导人7721肝癌细胞凋亡的增敏作用李惠平1 曹志敏2 邵玉霞1 孙 武1 贾廷珍1(11 北京大学第三医院肿瘤化疗放射病科北京 100083 ; 21 北京大学基础医学院免疫学系) 癌基因;癌肝细胞/ 遗传学;荧光2差异显示;基因表达目的:探讨新的人凋亡相关基因产物TFAR19 蛋白对羟基喜树碱诱导人7721 肝癌细胞凋亡的增敏作用。方法:将不同浓度的rhTF ...
1. 标本采集 在无菌条件下于健康产妇分娩后立即取新生儿脐带, 挤出脐带血管中的血液,放入装有含青链霉素的PBS液瓶中,2h之内行脐静脉内皮细胞培养。双抗:青霉素100u/ml; 链霉素100μl/mlPBS:KCl 0.2 g/L KH2PO4 0.24 g/L NaCl 8.0g/L Na2HPO4•7H2O 1.56g/L或Na2HPO4 1.44 g/L。 在800ml蒸馏 ...
提要: 目的 比较牛鲍式计数板、血球计数分析仪和Nageotte 血细胞计数板3 种白细胞计数法测定血液中微量白细胞的效果。方法 将1 份血液标本重复用3 种方法计数得出标准计数值并将此标本稀释至不同浓度以3 种计数法分别测定这些样品中白细胞的含量比较测试值与期望值。同时用这3 种方法检测了30 份过滤白细胞的血样中的微量白细胞。结果 牛鲍式计数板、血球计数分析仪在白细胞牛鲍式计数板测试值为“ ...
细胞凋亡相关基因与人类肿瘤杨银峰 李家林( 昆明医学院生化教研室 昆明650031 )摘要: 介绍细胞凋亡相关的基因以及这些基因的改变在恶性肿瘤的发生、发展及治疗中的作用。关键词: 细胞凋亡; 基因; 恶性肿瘤1. 细胞凋亡概述细胞凋亡(apoptosis) 即程序性细胞死亡(pro~grammed cell death PCD) 是在生理或病理条件下由基因调控的细胞主动程序化死亡过程。不同组织细 ...
摘要: 目的: 探讨一氧化氮(nitric oxide NO) 、总抗氧化能力(total antioxide capacity T2AOC) 对大鼠隐睾生殖细胞凋亡的影响。 方法: 健康SD 雄性大鼠20 只日龄22 d 时复制单侧隐睾模型。生物素2dUTP/ 酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡采用硝酸还原酶法测定睾丸组织中NO 含量化学比色法测定睾丸组织中T2AOC。结果: 术后第7 ...