致癌化学物转化细胞：转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验

1．取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰 蛋白酶 （含0.01％EDTA）37℃消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入75cm/培养瓶中，接种密度10～20×106/75cm，37℃培养2～3天，在顺利情况下能迅速长满瓶面。 2．贮存：选大批生长状态良好的细胞冻存，储以备用。 3．致癌物处理：取冻存细胞，解冻，接种于25ml培养瓶中，每瓶含细胞10万～30万。待细胞生长进入指数增生期时，向培养瓶中加入致癌剂MNNG。致癌剂量1～3微克/毫升营养液。在37℃温箱中培养12～48小时。 4．低 血清 培养：弃掉MNNG作用液，用温PBS洗1～3次，加入含20％小牛 血清 ，继续置温箱中培养2～3周，然后改用含5％血清培养液培养。低血清培养液不利于正常细胞生长，但已转化的细胞仍能增殖和形成转化灶。 5．转化灶形成和分离：在成功情况下，用致癌物处理过的细胞于10天后在正常细胞之间，可产生数量不等的转化灶。