促细胞分裂剂激活单核细胞

基本原理 ：

本方法是通过促细胞分裂剂与细胞表面受体相互作用，在体外触发细胞的多克隆激活。根据所使用的促细胞分裂剂的不同，应答细胞可以是T淋巴细胞、B淋巴细胞，或两者同时，或者是单核细胞。 细胞激活可以通过细胞增殖、细胞因子分泌、表面抗原表达和/或细胞体积的增加进行检测。例如在使用B细胞激活剂时，可以通过多克隆免疫球蛋白的分泌进行检测。

表1 常用的促细胞分裂剂和多克隆淋巴细胞激活剂

促细胞分裂剂	所 用 浓 度	应 答 细 胞
刀豆蛋白A ConA	1- 10 μg/ml	T 淋巴细胞
植物凝集素PHA	1-5 μg/ml	T 淋巴细胞
佛波醇酯PMA	1-10 ng/ml	T 淋巴细胞
娄诺霉素+PMA	100-500 ng/ml	T 淋巴细胞
脂多糖LPS	2-25 μg/ml	鼠B细胞（T不依赖型）， 单核细胞
美洲商陆PWN	试验测定	人B细胞（T依赖型）
葡萄球菌A，SAC	1/1000-1/10000	人B细胞

试剂 和设备：
细胞悬浮液；
96孔平底组织培养板；
含血清培养基（通常为 RPMI 1640,含10% 胎牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素）；
促细胞分裂剂（见表1），要求纯品或半纯品，有市售商品；
多通道移液器和微量移液器；
带570nm滤片的酶标仪；
超净工作台；
CO2孵箱；
冷冻离心机。