• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        怎样使昆虫细胞适应新的培养液

        互联网

        1270


        市场上供应的大多数培养液的配方非常接近,这使得细胞很容易适应新的培养液。这里我将详细介绍一个方法,这个方法是保守的,在大多数情况下可以进行删减一些步骤。最简单最节省时间的情况是把细胞直接分装到新的培养液中,观察几代以保证细胞的生长参数是可以接受的。这个方法适于悬浮细胞,不过也很容易扩展到贴壁细胞。
        细胞的生长参数

        1.翻倍时间(Doubling Time)
        细胞的翻倍时间在评价昆虫细胞健康程度的参数中是最容易测量的。翻倍时间应该在细胞处于对数期复制时测量,对于Sf9和Sf21细胞来说通常是介于16-24小时之间,不过大多数在20-22小时。
        dt=t×ln2/ln(Ct/Co),其中dt为翻倍时间,Co为起始细胞数目,Ct为经过时间t后的细胞数目,t为Co和Ct两次计数之间的间隔时间,所有的时间都以小时为单位。

        2.细胞大小(Cell Size)
        细胞的大小是监测细胞健康程度的一个非常有用的参数。如果细胞是健康的,细胞的大小均一,都处于该细胞株体积正常变化范围的下限。细胞的大小在不同的细胞株变化是很大的。对于我用过的Sf9和Sf21,典型的直径是16-18mm,不过我知道有些细胞株小至14 mm或者大至19 mm仍然很健康。

        3.滞后期(Duration of Lag)
        当细胞的密度较低时,会有一个滞后期,其长短取决于分装或者传代后细胞的密度。一般说来,该密度越低,滞后期越长。对于一个特定的细胞株来说,当这个密度高出一个阈值时,滞后期的长短与密度无关;而低于一个阈值时,滞后期无限长,细胞不再增殖。

        4.低密度分装极限(Low Density Split Tolerance)
        能够在一个较短的滞后期(小于12小时)复苏的细胞形状较好。不过这是细胞株的特性,需要进行实验来确定你的细胞株的密度极限。我的细胞株有些在分装成密度为5×104细胞/ml时仍然可以很好复苏,有些细胞株分装成5×105细胞/ml就不能复苏了。

        5.高密度极限(High Density Maximum)
        这是你的细胞能生长的最大密度,高于这个密度你的细胞将进入平台期。这个指标既和细胞株有关,又和使用的培养液有关。我建议先把你的细胞株培养至平台期,然后把一些分装到新鲜的培养液中以后,使剩下的继续生长至平台期,同时密切监测细胞状况。一般来说,细胞的培养要避免密度超过高密度极限的80%。对于我培养的细胞,这个极限值从2×106至12×106细胞/ml不等。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序