PCR扩增

来自该网站：http://www.archimedes.rwth-aachen.de/MolbioProtocols/Phage%20Display/PCR%20amplification%20of%20variable%20regions%20(SOE-Protocol).htmlThe SOE-Protocol given below utilises our initial set of primers for mouse and chiocken phage displ ...

聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆Ⅰ、 概 述　　PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤: (1) 变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链; (2) 退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;(3) 延伸(Extension):在Taq DNA聚合酶合成DNA的最适温度下,以目的DNA为模板进行 ...

这是我做PCR后跑的6%琼脂糖的电泳图。请各位分析一下，谢谢。我扩增的目的DNA只有59个碱基，一对引物只有12bp长，都是由公司合成的。我的反应体系如下Taq E.(5U/ul) 0.5ul1undefinedBuffer(Mg2+ free) 5ulMgCl2(25mM) 3ulundefineddNTP(各2.5mM) 4ulprimer1(20uM) 2ul （Tm=51.4）primer2(20uM) 2ul (Tm=44.6)Template(10ng/ul) 10ul (59bp ssDNA)dd ...

对琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳有非常详细的介绍,对于刚接触分生大的同志很有帮助.PCR扩增产物的电泳分析　　凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种.一、琼脂糖凝胶电泳:　　琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和 鉴定核酸的方法.琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物.根据琼脂糖的溶解温度， 把琼脂糖分为一般琼脂糖和低熔点琼脂糖.低熔点琼脂糖熔点为62～65℃，溶解后在 37℃下维持液体状态约数小时，主要用于DNA片 ...

PCR扩增技术，即聚合酶链式反应，是美国科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。 现在的PCR扩增不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。PCR扩增技术的基本原理PCR扩增，类似于DNA的天然复制过程，其特异性 ...

　 有谁能帮我解决相对定量时内参和目标产物的扩增效率问题？我用的反应体系为50ul：１０＊PCR buffer 1 ＊(终浓度）　　　　　　　　　　２mmol/l　dNTP 0.2mmol/l每种TaQnase 5U/IU 1U/50ul25mmol/l Mgcl2 2.5mmol/lintel reference Primer 1F 1umol/l1R 1umol/lMGB probe 0.25umol/ltarget Primer 1F 1umol/l1R 1umol/lMGB probe 0.25umol/lTemplate 0 ...

微孔板夹心杂交法颜色互补分析法PCR-ELISA法PCR-OLA法PCR-打点杂交法微孔板夹心杂交法：　　该法是通过一固定于微孔板的捕获探针与PCR产物的某一区域特 异杂交使产物的间接地固定于微孔板上，然后，再用一生物素 等非放射性标记物标记的检测探针与产物的另一特异性较一次 杂交，漂洗后显色即可判断结果。该法需要两个杂交过程来检测 一个产物，因此，其特异性较一次杂交的检测法高。该法已用于HBV 的检测，其敏感度可达5个HBVDNA分 ...

1．目的学会PCR操作的基本技术。2．原理是将待扩增的DNA模板加热变性，与其两侧互补的寡聚核苷酸引物复性，然后经过耐热的DNA聚合酶延伸。再进入下一轮变性—复性—延伸的循环，n次循环后DNA可被扩增（1+X）n倍。其中

Ambion公司的protocol:将合成的DNA(长度约55nt)溶解成1ug/ul,各取2ul,加46ul退火缓冲液(100mM乙酸钾，30mMHEPES-KOH pH7.4,2mM乙酸镁)，90度30min,37度1h,然后可以用来联接，或贮存于-20度。我们实验室有人按此方法成功了,我正在做。其他的非RNAi专用的退火条件有：TaKaRa:1.用STE缓冲液(10mM Tris pH8.0,50mM NaCl, 1mM EDTA)溶解DNA ...

Methods in Molecular Biology vol.687 Park D.J. (ed.) PCR Protocols Chapter 4PART II ：Cloning and SequencingLariat-Dependent Nested PCR for Flanking Sequence DeterminationDaniel J. ParkAbstractMethods detailed in this chapter relate to the use of Lariat-dependent Nested (LaN ...

Methods in Molecular Biology vol.687 Park D.J. (ed.) PCR Protocols Chapter 3PART II ：Cloning and SequencingIsolation of Genomic Insertion Sites of Proviruses Using Splinkerette-PCR-Based ProceduresBin YinAbstractThe availability of whole genomic sequences provides a gr ...

PCR检测微量感染因子时，容易因为污染的而导致各种问题，因此，进行PCR操作时，操作人员应该严格遵守一些操作规程，最大程度地降低可能出现的PCR污染或杜绝污染的出现。（1）划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：① 标本处理区，包括扩增摸板的制备；②PCR扩增区，包括反应液的配制和PC ...

选择单通道实验还是多通道实验？这是要根据实验需要来选择的，如果有一个、两个或是三个基因要进行比较，并用看家基因进行对照，可以考虑选择多通道实验。多通道实验的好处是可以消除样本加样的误差。但要克服的困难也比较多，一是条件的优化比较麻烦，即多种PCR反应以及探针要在同一个反应条件下进行，并且效率都要比较高，另一个困难是要求相互之间没有干扰，因为干扰会影响到实验结果。还有一个困难是当一个基因的模板数显著大于其他基因时 ...

前一段时间在百度中搜索，发现多年前写的一个关于荧光定量PCR技术的PPT有很多人看过或引用过，考虑到自己作荧光定量PCR工作已经了五年了，做的实验以及解决的问题远比五年前多了，因此利用过年的时间，写点荧光定量PCR实验中的一些注意事项及感想，无论对错，都是希望对相关的人员有些参考价值。荧光定量PCR原理等大家都已经很熟了，我就不细说了，主要是写一些有人问过的事，希望写的内容是大家都关心的。普通PCR与荧光定量 ...

RNA纯化和分析:起始RNA样品的质量是成功实验的最重要的因素之一。我强烈推荐使用QIAGEN的RNA纯化试剂盒来进行RNA纯化。RNA样品必须进行柱上DNase处理，以保证你的RNA的纯度。假如你的样品很特别，需要选择一个最合适的试剂盒进行纯化，请致电或e-mail联系QIAGEN技术人员，他们很乐意帮您选择一个合适的试剂盒。确保RNA样品适合进行PCR array。RNA样品进行PCR array实验前必须先通 ...

实时荧光定量PCR技术（Real-timequantitativePolymeraseChainReaction简称RealTimePCR）是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术。于1996年由美国Appliedbiosystems公司推出，是指对DNA或经过反转入（RT-PCR）的RNA通过聚合酶链式反应并实时监测DNA的放大过程，在扩增的指数增长期就测量扩增产物，因为扩增指数增长期测量值与特异D ...

转基因大米中Bt基因检测2014 年7 月，央视日前报道了湖南、湖北、安徽、福建等4省存在转基因大米的新闻，引发社会极大关注。记者在武汉市一家大型超市，随机购买5种大米。经检测后发现，这5 种大米中，有3 种含转基因成分：Bt63。Bt63 是一种抗虫害的基因，它是苏云金芽孢杆菌基因中的杀虫晶体蛋白基因，可以有效防止鳞翅目等多种有害昆虫。近年来转基因事件层出不穷，时有耳闻。那什么是转基因呢？转基因技术是提取特定生物体基因组中所需要的目 ...

1、Allele-specific PCR：等位基因特异性PCR，设计引物时选择在基因组的多态性区域，使等位基因的突变定位在（或接近）引物的3'端，在严谨的反应条件下，存在错配碱基的引物不能起始复制，而只有完全匹配的引物才能起始复制，产生的产物因此显示不同的基因型。2、Assembly PCR(也称作Polymerase Cycling Assembly或PCA)：组装PCR通过使用多个具有短重叠区的长的寡核苷酸来合成长的DNA ...

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一、PCR技术及步骤 聚合酶链式反应（PCR） ...