PCR引物设计

肖生祥 （西安医科大学第二临床医学院皮肤科，710004）　　 开展 PCR 应具有一定的条件。需要一个正规的 pCR 实验室，采集标本、核酸提取、扩增及产物分析应在不同的房间进行；需有严密的防污染措施、假阳性和假阴性结果的质控等。实验者应具有一定的分子生物学理论知识及实验技能，能够及时发现和纠正实验中的问题。目前，我国在 PCR 应用中尤其是在临床诊断中存在问题较多，主要表现为： PCR 试剂的 ...

Simple ja;ascript Oligo CalculatorOligo CalculatorEnter Oligo Sequence in Box Length Melting Temperature (Tm) °C %GC content Molecular Weight: daltons (g/M) OD of 1 is equal to picoMolar. ...

PCR产物的克隆 PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。 平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求不高，PCR产物也可不加处理。如果使用Stratagene公司的pfu DNA聚合 ...

　 聚合酶链反应-单链构象多态性分析（Single Strand Conformation Polymorphism Analysis of Polymerase Chain Reaction Products PCR-SSCP）是近年来发展起来的一种基因分析方法。 　PCR-SSCP分析的基本程序为：首先PCR扩增特定靶序列，然后将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。在不含 ...

逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。RT-PCR使RNA检测的灵敏性提高了几个数量级，使一些极为微量RNA样品分 ...

相关文件如下： 点击浏览该文件PCR方法相关产品:电泳设备紫外设备普通PCR仪定量PCR仪PCR/RT-PCR/qPCR试剂PCR引物 PCR试剂PCR对照特异性PCR试剂盒PCR克隆试剂盒RNA RNase检测/去除 RT-PCR试剂 RT-PCR标准品 定量PCR试剂 定量PCR标记 总RNA分离纯化盒PCR产物纯化核酸酶 聚合酶 反转录酶 ...

Various authors recommend DMSO and glycerol to improve amplification efficiency (higher amount of product) and specificity (no unspecific products) of PCR when used in concentrations varying between 5 ...

A variety of PCR additives and enhancing agents have been used to increase the yield specificity and consistency of PCR reactions. Whilst these additives may have beneficial effects on some amplificat ...

Beforehand.choose empirically the annealing temperature of primers; make sure you have enough PCR-plates Q-covers and sealing tape; prepare the stocks: PCR-buffer 5M Betaine - with some excess dNTPs p ...

Colony PCRDavid AmbergThis procedure will work for both yeast and E. coli:Take a small colony and suspend it in 5ul of H2O in a PCR tube. Heat for 5 min at 95¡C and then spin the condensation down in ...

INTRODUCTION The products of a PCR reaction - especially when this is done on eukaryotic genomic DNA and when using degenerate primers - often contain a mixture of discrete-sized bands one of which is ...

Disruption by Fusion PCRDavid Amberg and Ellen Beasley1) In separate PCR reactions amplify the 5' and 3' ends of the gene of interest with primers about 200 bases apart. Primer 2 should begin with 24 ...

collect piece of tissue (e.g. pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOH put in boiling H2O for 30 sec (optimum may need to be determined for each type of tissue for fl ...

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Polymerase Chain Reaction (PCR) to Amplify rRNA Gene FragmentPrepare sufficient master mix for both partners (45 mL/50 mL reaction) 10 mL 10x PCR buffer 10 mL 2.5 mM dNTPs (0.25 mM final concentration ...

（一）、仪器设备 英国Thermo Hybaid原位PCR仪。 （二）、操作流程 1、原位PCR步骤 1）预处理：（1）切片常规脱蜡；（2）0.2mol/L HCl处理10min；（3）5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min；（4）Nase消化组织37℃ 30min；（5）梯度酒精脱水，室温干燥。2） ...

RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有 ...

大批量、廉价、用于测序的PCR产物纯化方法--PEG沉淀 最近，摸索了一下PEG沉淀PCR产物的方法，贴出来，与大家共享。 目的：探索一种方法，能将PCR产物大批量地、廉价地、纯度比较高地纯化出来，并且最好能去掉200bp以下的小片段DNA，用于DNA测序。 有文献和方法说，不同浓度的PEG能沉淀不同长度的DNA，所以，先做了一下不同PEG浓度对DNA沉淀的作用，见下图，标本是用的50bp DNA ...

PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。常见问题如下： 一、假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及，④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质 ②模板中含有Taq酶抑制剂 ③模板中蛋白质没 ...

拖尾 　　现象：产物在凝胶上呈Smear状态。　　原因：　　1.模板不纯　　2.Buffer不合适　　3.退火温度偏低　　4.酶量过多　　5.dNTP、Mg2+浓度偏高　　6.循环次数过多　　对策：　　1.纯化模板　　2.更换Buffer　　3.适当提高退火温度　　4.适量用酶　　5.适当降低dNTP和镁离子的浓度　　6.减少循环次数　假阳性　　现象：空白对照出现目的扩增产物　　原因：　　靶序列或 ...